載脂蛋白A5調(diào)節(jié)甘油三酯代謝機(jī)制及其臨床意義.pdf

1、血漿甘油三酯（TG）升高是冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，引起高甘油三酯血癥（HTG）常見(jiàn)原因包括高果糖飲食、急性期反應(yīng)（APR）、代謝綜合征（MS）等。降低TG可有效防止冠心病，目前可降低TG的降脂藥物主要有：他汀類(lèi)、貝特類(lèi)和血脂康等。 載脂蛋白A5（ApoA5）是新發(fā)現(xiàn)的載脂蛋白超家族成員，大量研究均證實(shí)，ApoA5可顯著降低血漿TG。過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體-α（PPARa）和肝X受體-α（LXRα）是調(diào)節(jié)ApoA5表達(dá)的兩個(gè)關(guān)鍵

2、核受體，其中，前者上調(diào)ApoA5表達(dá)，而后者下調(diào)ApoA5表達(dá)。 然而，目前尚不清楚高果糖飲食、急性期反應(yīng)以及代謝綜合征誘導(dǎo)的HTG是否與ApoA5有關(guān)；也不知他汀類(lèi)、貝特類(lèi)或血脂康降低TG是否通過(guò)ApoA5而起作用。 目的： 明確高果糖飲食、急性期反應(yīng)以及代謝綜合征誘導(dǎo)的HTG是否與ApoA5有關(guān)，明確非諾貝特、阿托伐他汀和血脂康降TG作用是否與調(diào)節(jié)ApoA5有關(guān)，并探討核受體PPARa和LXRa對(duì)ApoA5表

3、達(dá)的調(diào)節(jié)作用。 方法： 一.果糖誘導(dǎo)性高甘油三血癥的動(dòng)物和體外實(shí)驗(yàn) 40只健康雄性Sprague-Dawley大鼠，隨機(jī)分為五組（n=8/組）：（1）對(duì)照組：正常普通飲食喂養(yǎng)；（2）HTG組：10％果糖水喂養(yǎng)2周建立高HTG大鼠模型，并繼續(xù)喂養(yǎng)4周；（3）貝特組：HTG大鼠建模后，加予非諾貝特（100 mg/kg/天）干預(yù)4周；（4）他汀組：HTG大鼠建模后，加予阿托伐他汀（10 mg/kg/天）干預(yù)4周；（5）

4、聯(lián)合組：HTG大鼠建模后，加予非諾貝特（100 mg/kg/天）和阿托伐他汀（10mg/kg/天）干預(yù)4周。分別在0周、2周及6周測(cè)定體重和空腹血脂。6周后取動(dòng)物肝臟組織標(biāo)本，采用免疫組化、逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）及免疫印跡（WB）測(cè)定肝臟ApoA5的基因和蛋白表達(dá)，同時(shí)采用RT-PCR和WB測(cè)定肝臟PPARa和LXRα的基因和蛋白表達(dá)。 以HepG2細(xì)胞為模型，觀(guān)察果糖、非諾貝特和阿托伐他汀干預(yù)后，細(xì)胞TG濃度變化

5、，ApoA5、PPARα和LXRα表達(dá)的改變，并通過(guò)PPARα或LXRα的激動(dòng)劑或抑制劑干預(yù)，揭示三者調(diào)控ApoA5表達(dá)的機(jī)制。 二.急性期反應(yīng)性高甘油三酯血癥的臨床、動(dòng)物及體外實(shí)驗(yàn) （一）ACS臨床試驗(yàn) 入選228例ACS患者和232名健康者作為研究對(duì)象，抽血分離血漿，采用酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（ELISA）測(cè)定ApoA5血漿濃度，同時(shí)測(cè)定血漿C-反應(yīng)蛋白和血脂水平。 （二）急性炎癥動(dòng)物和體外實(shí)驗(yàn) 3

6、2只6周齡健康雌性C57BL/6鼠，隨機(jī)分為4組（n=8/組）：（1）對(duì)照組，普通飲食喂養(yǎng)；（2）炎癥組，普通飲食喂養(yǎng)4周后，腹腔注射100μg脂多糖（LPS）以建立急性炎癥模型；（3）他汀組：阿托伐他汀（10 mg/kg/天）干預(yù)4周后，腹腔注射LPS；（4）貝特組，非諾貝特（100 mg/kg/天）干預(yù)4周后，腹腔注射LPS。分別在實(shí)驗(yàn)第0周、第4周注射LPS前、以及注射LPS后測(cè)定空腹血脂和腫瘤壞死因子-α（TNFα）血漿水平。注

7、射LPS后取動(dòng)物肝臟組織標(biāo)本，采用RT-PCR和WB測(cè)定肝臟ApoA5和PPARα的基因和蛋白表達(dá)。 體外觀(guān)察人重組TNFα對(duì)HepG2細(xì)胞TG及ApoA5和PPARα表達(dá)的影響，同時(shí)觀(guān)察阿托伐他汀和非諾貝特對(duì)TNFα刺激下肝細(xì)胞ApoA5表達(dá)的影響及其機(jī)制。 三.血脂康降低冠心病患者甘油三酯的機(jī)制研究 （一）血脂康降脂臨床試驗(yàn) 入選60例穩(wěn)定性冠心病患者，隨機(jī)分為兩組，即血脂康組和對(duì)照組，分別接受血脂康

8、（600 mg/次，一天兩次）和安慰劑治療，療程共6周。實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)第6周，采用ELISA測(cè)定血漿ApoA5濃度，同時(shí)測(cè)定空腹血脂水平。 （二）動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 32只健康雄性Sprague-Dawley大鼠，隨機(jī)分為四組（n=8/組）：（1）對(duì)照組：正常普通飲食喂養(yǎng)；（2）高甘油三酯血脂（HTG）組：10％果糖水喂養(yǎng)2周建立HTG大鼠模型，并繼續(xù)喂養(yǎng)4周；（3）血脂康低劑量（L-XZK）組，10％果糖水喂養(yǎng)2周建立HTG

9、大鼠模型后，加予血脂康20 mg/kg/天進(jìn)行藥物干預(yù)，干預(yù)4周；（4）血脂康高劑量（H-XZK）組，建立HTG大鼠模型后，加予血脂康40 mg/kg/天進(jìn)行藥物干預(yù)，干預(yù)4周。分別在實(shí)驗(yàn)前（0周）、實(shí)驗(yàn)后2周及6周測(cè)定空腹血脂水平。分別采用RT-PCR和WB測(cè)定肝臟ApoA5、PPARα和LXRα的基因和蛋白表達(dá)。 體外觀(guān)察血脂康干預(yù)對(duì)HepG2細(xì)胞TG、以及ApoA5、PPARα和LXRα表達(dá)的影響及其機(jī)制。 四.代

10、謝綜合征I臨床、動(dòng)物及體外實(shí)驗(yàn) （一）代謝綜合征臨床試驗(yàn) 入選340例代謝綜合征（MS）患者和342名健康者作為研究對(duì)象，采用ELISA測(cè)定ApoA5血漿濃度，同時(shí)測(cè)定空腹血脂、血糖和胰島素，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）。 （二）動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn) 24只8周齡的健康雄性Sprague-Dawley大鼠，隨機(jī)分為3組（n=8/組）：（1）對(duì)照組：普通飲食；（2）MS組：高果糖飲食（含60％果糖），喂養(yǎng)

11、7周；（3）貝特組：高果糖飲食加予非諾貝特100mg/kg/天，干預(yù)7周。分別在實(shí)驗(yàn)第0周和第7周測(cè)定空腹血脂和尾動(dòng)脈血壓，并通過(guò)高胰島素正常血糖鉗夾技術(shù)測(cè)定胰島素敏感性。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取動(dòng)物肝臟組織標(biāo)本，采用RT-PCR和WB測(cè)定肝臟ApoA5的基因和蛋白表達(dá)。 通過(guò)高濃度胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞，構(gòu)建胰島素抵抗（IR）肝細(xì)胞模型，體外觀(guān)察胰島素抵抗?fàn)顩r下肝細(xì)胞的ApoA5表達(dá)和TG變化，探討非諾貝特對(duì)IR狀況下肝細(xì)胞ApoA5

12、表達(dá)的影響及其機(jī)制。 結(jié)論： 1.果糖通過(guò)抑制PPARα并上調(diào)LXRα表達(dá)，抑制肝臟ApoA5表達(dá)，誘導(dǎo)HTG；非諾貝特和阿托伐他汀均通過(guò)上調(diào)ApoA5表達(dá)，治療果糖誘導(dǎo)性HTG，且二者在A(yíng)poA5表達(dá)調(diào)控上存在機(jī)制互補(bǔ)性。 2.急性期反應(yīng)可升高血漿TG，此時(shí)ApoA5也顯著升高，但可能是機(jī)體的一種代償，與此時(shí)PPARα表達(dá)下調(diào)關(guān)系不大；非諾貝特和阿托伐他汀均能降低急性炎癥所致TG升高，但該作用不完全通過(guò)ApoA