高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠胰島內(nèi)胰淀素的表達(dá)及對(duì)凋亡的影響及二甲雙胍、羅格列酮的作用.pdf

1、研究目的：(1)觀察胰島素抵抗形成過(guò)程中不同時(shí)段胰島內(nèi)胰島胰淀素的表達(dá)，及胰島內(nèi)凋亡的發(fā)生，并分析是否具有相關(guān)性(2)應(yīng)用二甲雙胍及羅格列酮藥物進(jìn)行干預(yù)，是否能夠降低胰淀素的表達(dá)，是否能夠逆轉(zhuǎn)胰島的凋亡或者對(duì)抗脂毒性引起的凋亡。 實(shí)驗(yàn)對(duì)象及研究方法 (1)40只Wistar雄性大鼠，隨機(jī)分為高脂組和正常飼料對(duì)照組，每組20只，同期喂養(yǎng)，各組再分別為喂養(yǎng)10、14、16、18、20周五個(gè)亞組，每亞組大鼠4只。 (2

2、)36只Wistar雄性大鼠，隨機(jī)分為藥物干預(yù)組(二甲雙胍及羅格列酮組各12只)，高脂組、對(duì)照組，每組6只。其中藥物干預(yù)分為胰島素抵抗模型形成時(shí)開(kāi)始干預(yù)與高脂飼養(yǎng)開(kāi)始即飼養(yǎng)組兩組，分別飼養(yǎng)8周。其中二甲雙胍劑量為300mg／kg.d，羅格列酮為4mg／kg.d，其中對(duì)照組與高脂組分別為4ml／d。 按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，在各時(shí)段末處死動(dòng)物。處死前前禁食過(guò)夜12-14小時(shí)，以0.3％戊巴比妥鈉(40mg／kg)腹腔注射麻醉。麻醉后先斷尾取

3、血測(cè)血糖。然后開(kāi)胸，暴露心臟，從心臟中取血2ml，用于測(cè)定胰島素、游離脂肪酸、甘油三酯及膽固醇等指標(biāo)。迅速取出胰腺，均于冰PBS中洗去血液，將胰腺組織分出其中一部分來(lái)行免疫組化，病理切片及電鏡。將獲得的動(dòng)物的胰腺分別進(jìn)行組織標(biāo)本的制備、HE染色切片上測(cè)定胰島面積，免疫組織化學(xué)檢測(cè)胰島中胰淀素的表達(dá)，剛果紅染色檢測(cè)胰島中的淀粉樣蛋白，TUNEI，檢測(cè)胰島細(xì)胞的凋亡，電鏡檢測(cè)藥物觀察干預(yù)后胰島B細(xì)胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果：1 在胰

4、島素抵抗的發(fā)生過(guò)程中，較對(duì)照組而言，10、14、16、18、20周胰淀素信號(hào)增強(qiáng)，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在胰島內(nèi)剛果紅染色信號(hào)在10、14周無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在16周時(shí)染色信號(hào)增強(qiáng)，并較正常組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，18、 20周差異明顯。2 胰島內(nèi)細(xì)胞發(fā)生凋亡，在高脂組從10周開(kāi)始出現(xiàn)，較對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而在對(duì)照組，16周正常組胰島內(nèi)出現(xiàn)凋亡。 3 對(duì)胰島內(nèi)的凋亡率及胰島內(nèi)胰淀素的IOD值及剛果紅染色的IOD值進(jìn)行相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)凋亡率與胰淀素的IO

5、D值呈正相關(guān)性，而與胰島內(nèi)剛果紅染色的IOD值無(wú)相關(guān)性。4 運(yùn)用二甲雙胍及羅格列酮藥物干預(yù)后，都能減少胰淀素的表達(dá)，降低胰島淀粉樣沉積，胰島內(nèi)凋亡較對(duì)照組顯著減少。 結(jié)論：(1)高脂組肥胖大鼠在IR形成過(guò)程中伴隨者胰島內(nèi)胰淀素的表達(dá)逐漸升高，并進(jìn)行相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)胰島內(nèi)細(xì)胞發(fā)生的凋亡率與胰島內(nèi)Amylin染色I(xiàn)OD值正相關(guān)。與胰島內(nèi)剛果紅染色I(xiàn)OD無(wú)相關(guān)性。 (2)二甲雙胍及羅格列酮能降低胰島內(nèi)胰淀素的表達(dá)，能拮抗胰島素抵