基于抗炎生物活性導(dǎo)向的不同品系菊花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.pdf

1、菊花是菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序。許多研究表明，菊花有著多方面的生物活性，例如，抗炎、抗氧化、抗菌、抗癌和心血管的保護(hù)作用。根據(jù)生長地區(qū)和加工過程的不同，菊花可以分為亳菊（安徽亳州）、滁菊（安徽滁州）、貢菊（安徽黃山）、杭白菊（浙江桐鄉(xiāng)）和懷菊（河南焦作）五個主要品種。實(shí)際上，這五種菊花在藥用和茶飲中都沒有很明顯的區(qū)分，他們在藥典里都被歸為“菊花”。當(dāng)前，只有綠原酸、木犀草苷和

2、異綠原酸A被藥典規(guī)定為含量檢測的成分，至今仍沒有關(guān)于與生物活性關(guān)聯(lián)的區(qū)分幾個菊花品種的全面報(bào)道。而這會對菊花的質(zhì)量和安全性產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。更嚴(yán)重的是，現(xiàn)在中藥材市場上菊花的質(zhì)量差異很大，仍然存在著大量的不合格產(chǎn)品。所以，很有必要建立一個能快速有效的檢測菊花質(zhì)量的方法體系。
　　在本實(shí)驗(yàn)中，我們首先在體內(nèi)和體外對菊花的抗炎效果進(jìn)行了評價(jià)。建立了銅綠假單胞菌感染的小鼠肺部急性感染模型，結(jié)果表明，菊花給藥后能顯著提高小鼠的存活率，降低T

3、NF-α、IL-6和IL-8等炎癥因子的表達(dá)，減少肺部細(xì)胞因子及免疫細(xì)胞的浸潤，改善肺部組織的水腫、壞死脫落。另外，建立了腫瘤壞死因子-α刺激人腎上皮細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥模型，利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)對50批菊花給藥后NF-κB的表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在亳菊、滁菊、貢菊、杭白菊和懷菊中分別有5，4，6，7，6個批次有抗炎活性，說明市場上售賣的菊花樣品并不是都有著很好的生物活性，其質(zhì)量參差不齊。
　　對50批菊花樣品進(jìn)行了UPLC-Q

4、/TOF MS分析，然后利用主成分分析和偏最小二乘法分析，對50批樣品的質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，由得分圖可知，5種菊花樣品有著很明顯的分離趨勢，分離度較大，從載荷圖中分析得到了19個對分類貢獻(xiàn)最大的標(biāo)記物。
　　實(shí)驗(yàn)采用了熱圖分析的方法對19個標(biāo)記物在50個菊花樣品中的相對含量進(jìn)行了分析。另外，利用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（ANN）分析方法，對19個標(biāo)記物和50個樣品的生物活性間的關(guān)系進(jìn)行了分析。分析熱圖結(jié)果，發(fā)現(xiàn)19個標(biāo)記物在50個樣品中的含量分

5、布沒有明顯的規(guī)律性，而通過ANN分析后，得到6個含量與生物活性成正相關(guān)的單體，分別為綠原酸、芹菜素-7-O-新陳皮糖苷、異綠原酸A、雛菊葉龍膽酮、木犀草素、芹菜素-7-O-半乳糖苷和去甲當(dāng)藥苷，其中綠原酸和木犀草素的含量變化與生物活性變化成完全的正相關(guān)關(guān)系。因此，這兩個單體是我們后續(xù)研究的重點(diǎn)對象。
　　實(shí)驗(yàn)建立了一種簡便、快速的UPLC/Q-TOF-MS結(jié)合雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)的篩選NF-κB抑制劑的分析方法，對菊花樣品中的抗

6、炎成分進(jìn)行篩選鑒定，共篩選出3種結(jié)構(gòu)類型的NF-κB抑制劑，分別為:咖啡?；鼘幩犷悾ňG原酸、異綠原酸A和異綠原酸B），黃酮類（木犀草素、木犀草素-7-O-蕓香糖苷，木犀草素-7-O-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-6"-丙二?；咸烟擒铡⑶鄄怂?7-O-蕓香糖苷和芹菜素-7-O-葡萄糖苷）和黃酮醇類（槲皮素-7-O-半乳糖苷和槲皮素-3-O-葡萄糖苷）。
　　按照藥典規(guī)定的檢測方法，對綠原酸、木犀草苷、異綠原酸A和木犀草素在50批菊花

7、樣品中的含量進(jìn)行了高效液相色譜法定量分析。有17批樣品不合格，與前面的活性檢測結(jié)果大體一致。另外，利用四個單體的定量數(shù)據(jù)對有活性和無活性樣品進(jìn)行了PLS-DA分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，利用四個單體的定量數(shù)據(jù)聚類的結(jié)果比只利用藥典里規(guī)定的三個單體的聚類結(jié)果要好的多，有活性組和無活性組能明顯的區(qū)分開。所以，我們建議將木犀草素也作為菊花質(zhì)檢的一個重要指標(biāo)。
　　總之，本實(shí)驗(yàn)建立了一個串聯(lián)的整合了超高效液相色譜質(zhì)譜串聯(lián)儀、主成分分析、熱圖分析和人工