桑黃菌不同培養(yǎng)方法的抗癌活性研究.pdf

1、桑黃是已知生物抗癌領(lǐng)域有效率最高的大型真菌，近年來由于過度開采，桑黃野生資源匱乏，人工培養(yǎng)技術(shù)尚不成熟，使其成為真菌類藥物研究和開發(fā)的熱點。目前關(guān)于桑黃的文獻(xiàn)資料報道主要集中在人工培養(yǎng)、抗癌機(jī)理及功能成分的研究。但人工培養(yǎng)還處于實驗室階段，抗癌機(jī)理和有效成分的研究尚不清楚。本論文選用日本桑黃和韓國桑黃兩個菌種，采用固體發(fā)酵法培養(yǎng)菌絲體和子實體，通過單因素和正交試驗確定液體培養(yǎng)條件進(jìn)行液體純菌絲的培養(yǎng)。利用水提醇沉法提取固體菌質(zhì)、子實體和

2、菌絲中的多糖。以環(huán)磷酰胺抗腫瘤藥物為對照，建立小鼠S180腫瘤移植模型，對不同培養(yǎng)條件下提取得桑黃多糖進(jìn)行抑瘤效果的評價。利用薄層層析和島津GC-14B氣相色譜進(jìn)行單糖組成分析。 試驗結(jié)果顯示：固體菌質(zhì)培養(yǎng)的主料分別為棉籽殼和鋸末，相對于韓國桑黃，日本桑黃菌絲萌發(fā)、生長速度稍快。子實體的培養(yǎng)基以棉籽殼為主料，韓國桑黃子實體的分化、發(fā)育和成熟時間只需日本桑黃的1/2～2/3，分別為17～19d、19～24d和32～40d。韓國桑黃

3、成熟子實體呈半球形，白黃色，日本桑黃呈馬蹄形，黑褐色。桑黃菌的液體培養(yǎng)最適碳源為玉米粉，最適氮源為麩皮，最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為(g/L)：玉米粉45、麩皮25、KH2PO42、MgSO4·7H2O1。最適發(fā)酵參數(shù)為：接種量15％(V/V)、培養(yǎng)溫度27℃、搖瓶轉(zhuǎn)速160r/min、裝液量160mL/500mL三角瓶、培養(yǎng)時間160h。在上述條件下桑黃最大菌絲生成量1.42g(干菌絲)/100mL。 影響桑黃多糖提取率的主要因素是提

4、取次數(shù)，其次分別為提取時間、提取溫度和料液比。確定最佳提取工藝組合為：提取2次，95℃提取2h，料液比1:50.在此提取條件下，子實體多糖提取率分別為3.69％(H)、6.27％(R)，菌絲體(H)提取率為4.4％，固體菌質(zhì)多糖平均提取率為2.87％～3.72％。 100只小白鼠隨機(jī)平均分成10組，分別為空白組、陰性對照組、陽性對照組和桑黃多糖組?？瞻捉M和陰性對照組給水，陽性對照組喂以環(huán)磷酰胺，多糖灌胃劑量為200mg/(Kg·

5、bw)。實驗結(jié)果表明腫瘤生長正常，藥物無毒性反應(yīng)。桑黃子實體(R)抗癌效果最強(qiáng)，高達(dá)72.64％，子實體(H)為52.36％，菌絲體為32.51％，固體菌質(zhì)多糖抗癌效果不明顯。 多糖經(jīng)DEAE-52纖維素柱層析，脫色效果明顯，韓國桑黃子實體多糖略帶黃色，日本桑黃子實體多糖為乳白色。本試驗采用薄層層析法(TLC)對桑黃子實體多糖的單糖組成定性分析。展開劑為：乙酸乙酯：吡啶：乙酸：水=10:11:2:3，各種單糖的Rf值為：鼠李糖0

6、.727，木糖0.576，葡萄糖0.303，阿拉伯糖0.412，果糖0.504，甘露糖0.504，半乳糖0.212。氣象色譜對多糖中的單糖定量分析，結(jié)果表明：韓國桑黃(H)單糖組成為鼠李糖，阿拉伯糖，葡萄糖，甘露糖和半乳糖，含量分別為0.258mg/mL，0.524mg/mL，9.875mg/mL，0.905mg/mL，0.659mg/mL，回收率為97.2％。日本桑黃(R)單糖組成為鼠李糖，阿拉伯糖，木糖，葡萄糖，甘露糖和半乳糖，含量