2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、雪蓮菌,又稱西藏靈菇、藏靈菇,英文名Tibetan Kefir Grain,是一種對牛乳等有發(fā)酵作用的天然混菌體系。本文以采集自我國4個不同地區(qū)的雪蓮菌樣品為研究對象,研究了其菌相組成及抗癌活性。雪蓮菌樣品分別為:TK-ZJUJ01來源于拉薩,TK-ZJUJ02來源于成都,TK-ZJUJ03來源于烏魯木齊,TK-ZJUJ04來源于西寧。
   通過傳統(tǒng)的菌種鑒定方法,分離純化鑒定到了各個雪蓮菌樣品中的可培養(yǎng)微生物:TK-ZJUJ

2、01中分離純化得到枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis),乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),馬克斯克魯維酵母菌(Kluyveromyces marxianus),以及釀酒酵母菌(Saccharomyce cerevisiae);TK-ZJUJ02中分離純化得到開菲爾乳桿菌(Lactobacilluskefiri),kudriavzevii畢赤酵母菌(Pichia kudriavzevii),馬克斯克魯維酵母

3、菌(Kluyveromyces marxianus),單孢釀酒酵母菌(Kazachstania unispora);TK-ZJUJ03中分離純化得到乳明串珠菌(Leuconostoc lactis),乳酸乳球菌(Lactococcus lactis),植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum),單孢釀酒酵母菌(Kazachstania unispora),馬克斯克魯維酵母菌(Kluyveromyces marxianu

4、s),exigua釀酒酵母菌(Kazachstania exigua);TK-ZJUJ04中分離純化得到植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum),fabarum醋酸菌(Acetobacter fabarum),單孢釀酒酵母菌(Kazachstania unispora),季也蒙畢赤酵母菌(Pichia guilliermondii)。其中Pichia kudriavzevii和Pichia guilliermondi

5、i兩種酵母菌是第一次在雪蓮菌中發(fā)現(xiàn)。
   通過宏基因組學高通量測序的方法對4個雪蓮菌樣品進行了細菌組成多樣性分析,得到了更全面的細菌組成結果。在4個雪蓮菌樣品中,共鑒定到11個屬:乳球菌屬(Lactococcus),乳桿菌屬(Lactobacillus),醋酸菌屬(Acetobacter),明串珠菌屬(Leuconostoc)和鏈球菌屬(Streptococcus),希瓦氏菌屬(Shewanella),不動桿菌屬(Acinet

6、obacter),(Pelomonas)屬,(Dysgonomonas)屬,魏斯氏菌屬(Weissella)和假單胞菌屬(Pseudomonas),其中后6個屬是第一次在雪蓮菌中發(fā)現(xiàn)。α-多樣性及β-多樣性分析表明,不同來源的雪蓮菌其細菌菌相組成雖然不同,但多樣性程度相近,雪蓮菌中的菌相在“種”的水平上組成各有不同,但在“屬”的水平上組成穩(wěn)定。主成分分析(PCA)分析表明,對雪蓮菌的菌相組成多樣性貢獻最大的三個屬分別為乳桿菌屬(Lact

7、obacillus),乳球菌屬(Lactococcus)和醋酸菌屬(Acetobacter)。
   通過對4個雪蓮菌菌粒的復配培養(yǎng)得到了最優(yōu)重組菌粒TK-ZJUJ06。菌相分析表明,重組菌粒菌相組成多樣性程度降低,細菌組成中的優(yōu)勢菌相乳桿菌屬(Lactobacillus),乳球菌屬(Lactococcus)及醋酸菌屬(Acetobacter)等組成穩(wěn)定而風險菌相比例下降;而酵母菌經(jīng)分離純化只鑒定到釀酒酵母(Saccharomy

8、ce cerevisiae)。發(fā)酵性能測定表明,TK-ZJUJ06發(fā)酵性能及揮發(fā)性物質(zhì)產(chǎn)生穩(wěn)定,將TK-ZJUJ06作為進一步研究對象。
   噻唑藍實驗(MTT)、流式細胞儀(FCM)及實時熒光定量(RT-PCR)分析表明,雪蓮菌TK-ZJUJ06發(fā)酵乳Cell-free fraction對人胃癌細胞SGC7901的增殖具有抑制作用,并在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴關系,當作用濃度為8 mg mL-1時,癌細胞存活率為22%,抑制作用

9、顯著。進一步的機制探討表明,雪蓮菌TK-ZJUJ06發(fā)酵乳Cell-free fraction能夠阻遏人胃癌細胞SGC7901由Gl期向S期的過渡,并通過上調(diào)bax基因(從3.30±0.19上調(diào)至14.25±0.31)和下調(diào)bcl-2基因(從9.50±0.23下調(diào)至4.72±0.11)的表達量而誘導SGC7901細胞發(fā)生早期(50.41%)及晚期凋亡(9.89%)。
   響應面實驗設計(RSM)優(yōu)化了雪蓮菌粒TK-ZJUJ06

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