榆干離褶傘發(fā)酵液的溶栓作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究榆干離褶傘發(fā)酵液的溶栓作用及其機(jī)制。
　　方法：
　?。?）細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：采用MTT法測定L.u發(fā)酵液對HUVEC存活率的影響；H2O2誘導(dǎo)HUVEC凋亡，MTT法檢測L.u發(fā)酵液以及含藥血清對HUVEC存活率的影響；通過DNA ladder檢測L.u發(fā)酵液對HUVEC凋亡的影響；用流式細(xì)胞儀檢測凋亡率；Western bolt檢測Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3等蛋白的表達(dá)；比色法檢測細(xì)胞培

2、養(yǎng)液中LDH活性。
　?。?）動物實(shí)驗(yàn)：在體外檢測水解纖維蛋白的能力和血凝塊溶解時(shí)間；觀察給予L.u發(fā)酵液后對小鼠體內(nèi)出、凝血時(shí)間的影響，建立實(shí)驗(yàn)性高血脂癥，測定L.u發(fā)酵液對小鼠甘油三酯（TG）和總膽固醇（TC）的影響以及肝勻漿的SOD、GSH、MDA等抗氧化指標(biāo)；20％Fecl3誘導(dǎo)大鼠頸動脈血栓形成，檢測L.u發(fā)酵液的溶栓作用，并采用ELISA法測定血漿中t-PA、PAI-1、ET-1指標(biāo),硝酸還原酶法檢測NO水平。

3、　　結(jié)果：
　?。?）細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：MTT結(jié)果顯示，在一定濃度范圍內(nèi)，L.u發(fā)酵液對HUVEC有保護(hù)作用；DNA ladder檢測結(jié)果表明，模型組HUVEC可見凋亡條帶，而高劑量用藥組處理48h后的HUVEC凋亡條帶不明顯；流式細(xì)胞儀檢測的結(jié)果顯示，與模型組相比各用藥組凋亡率顯著降低；Western bolt結(jié)果顯示，與模型組比較，用藥組可以明顯促進(jìn)Bcl-2基因表達(dá)，同時(shí)能降低Bax，Caspase-9和Caspase-3基因表達(dá)；

4、比色法檢測細(xì)胞上清液的LDH活性的結(jié)果顯示，與模型組相比，用藥組呈劑量依賴性的降低了LDH活性。
　?。?）在動物實(shí)驗(yàn)中，L.u發(fā)酵液可水解纖維蛋白，明顯延長小鼠出凝血時(shí)間，血凝塊體外溶解率升高，并且明顯降低了實(shí)驗(yàn)性高血脂癥小鼠的血脂水平，降低了MDA的含量，升高了GSH和SOD的活性。大鼠血栓模型實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用藥組顯著降低血栓重量；與模型組比較，用藥組ET-1與NO水平均升高，但兩者比值降低；高劑量用藥組PAI-1、t-PA水