榆干離褶傘溶栓酶對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠前DIC的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:研究榆干離褶傘（Lyophyllum ulmarium，L.u）溶栓酶對脂多糖誘導(dǎo)的大鼠前彌散性血管內(nèi)凝血模型的保護(hù)作用。
　　方法:(1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):以10μg/L的脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷后，用MTT法測定L.u溶栓酶對HUVEC存活率的影響;收集細(xì)胞上清液檢測LDH、ICAM-1、IL1-β以及TNF-α水平;(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):以脂多糖腹腔注射誘導(dǎo)大鼠前彌散性血管內(nèi)凝血模型

2、，利用HE染色觀察肝、肺組織以及腹主動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化;ELISA方法測定血漿TM、ET-1、D2D、IL-6、IL-1β、TNF-α、P-選擇素、AT-Ⅲ以及Fib水平;比色法測定AST、ALT、ALB、BUN和Cr水平。Western blot方法觀察肝組織TLR4、p-TAK1、IκB-α、NF-κB、p-NF-κB以及COX-2蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:(1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):MTT結(jié)果顯示:L.u溶栓酶提高脂多糖誘導(dǎo)損傷的HUVE

3、C存活率，并降低細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH、ICAM-1、IL-1β以及TNF-α水平。
　　(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):HE染色結(jié)果顯示，對照組中央靜脈結(jié)構(gòu)良好，肝索呈放射狀指向中央靜脈。脂多糖誘導(dǎo)大鼠損傷后，肝和肺組織出現(xiàn)了明顯的變化。肝臟中央靜脈大量充血，肝索走向紊亂，部分肝細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)消失，肝細(xì)胞壞死，有血栓形成。與模型組相比較，L.u溶栓酶低、高劑量組大鼠的肝組織中央靜脈充血明顯減少，肝索及肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常。對照組肺泡結(jié)構(gòu)良好，肺間質(zhì)

4、中無水腫，肺泡腔內(nèi)無炎癥細(xì)胞浸潤現(xiàn)象。經(jīng)脂多糖損傷后出現(xiàn)急性肺損傷病理變化，表現(xiàn)為肺泡結(jié)構(gòu)被破壞以及肺泡間隔增厚，肺泡腔、血管腔大量炎癥細(xì)胞浸潤，微血栓形成。與模型組相比，L.u溶栓酶低劑量組肺泡間隔增厚嚴(yán)重，但無明顯炎癥細(xì)胞浸潤，無微血栓形成。高劑量組，肺間質(zhì)增厚減輕無明顯炎癥細(xì)胞浸潤，無微血栓形成。腹主動(dòng)脈HE染色結(jié)果顯示，對照組血管內(nèi)膜結(jié)構(gòu)良好，經(jīng)過脂多糖損傷后，模型組腹主動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)性被破壞，L.u溶栓酶低、高劑量組預(yù)處

5、理后，血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常。
　　ELISA檢測結(jié)果表明，與對照組相比較，模型組TM、ET-1、D2D、IL-6、IL-1β、TNF-α、P-選擇素以及Fib水平明顯上升，AT-Ⅲ水平下降，與模型組相比，L.u溶栓酶低、高劑量組TM、ET-1、D2D、IL-6、IL-1β、TNF-α、P-選擇素以及Fib水平明顯下降，AT-Ⅲ水平上升;與對照組相比較，AST、ALT、BUN和Cr水平升高，ALB水平下降，與模型組相比，AST、

6、ALT、BUN和Cr水平下降，ALB水平升高。Western blot結(jié)果表明:與對照組相比，模型組TLR4、p-TAK1、NF-κB、p-NF-κB和COX-2蛋白表達(dá)水平增加，IκB-α的蛋白表達(dá)水平明顯減少;與模型組相比，L.u溶栓酶低、高劑量組TLR4、p-TAK1、NF-κB、p-NF-κB和COX-2蛋白表達(dá)明顯減少，而IκB-α蛋白表達(dá)水平明顯增多。
　　結(jié)論:(1)L.u溶栓酶具有抗炎作用。
　　(2)L.u