榆干離褶傘溶栓酶對(duì)乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:研究榆干離褶傘（L.u）溶栓酶對(duì)乙醇誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及抗血小板的作用。
　　方法:(1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):用200μmol/L乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷后，利用MTT法檢測(cè)L.u溶栓酶對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞存活率;檢測(cè)細(xì)胞上清液LDH活性;AO/EB雙染法觀察內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的線粒體跨膜電位和總活性氧的含量;Western bolt方法觀察Caspase-8、Caspase-9、Cleaved Caspase-3

2、、細(xì)胞色素C蛋白的表達(dá);(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):40％乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷大鼠模型，HE染色觀察頸動(dòng)脈形態(tài)學(xué)變化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板CD62p水平;ELISA法測(cè)定血清Ang-Ⅱ、ET-1、Renin、NOS、iNOS、eNOS水平;測(cè)定血清SOD、MDA、T-AOC和NO水平。
　　結(jié)果:(1)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):MTT結(jié)果表明，L.u溶栓酶對(duì)乙醇誘導(dǎo)的氧化損傷有保護(hù)作用;與模型組相比，用藥組細(xì)胞上清液的LDH活性下降;AO/EB染色結(jié)果顯示，

3、模型組內(nèi)皮細(xì)胞固縮成圓狀且呈橘黃色，部分細(xì)胞胞漿出現(xiàn)空泡狀結(jié)構(gòu)，且出現(xiàn)紅染結(jié)構(gòu)，用藥后內(nèi)皮細(xì)胞紅染結(jié)構(gòu)逐漸消失，凋亡細(xì)胞減少，細(xì)胞形態(tài)逐漸恢復(fù)正常結(jié)構(gòu);流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體跨膜電位和總活性氧結(jié)果表明，與模型組相比用藥組的線粒體跨膜電位明顯升高，而細(xì)胞內(nèi)活性氧含量明顯下降;Western bolt結(jié)果表明，與模型組相比，用藥組明顯減少細(xì)胞色素C、Cleaved Caspase3、蛋白的表達(dá)，增加Caspase8、Caspase9蛋白表達(dá)。

4、(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，HE染色結(jié)果顯示:乙醇誘導(dǎo)損傷后血管?chē)?yán)重收縮，血管內(nèi)皮細(xì)胞層斷續(xù)，內(nèi)皮細(xì)胞脫落明顯;用藥組血管收縮程度減少，內(nèi)皮細(xì)胞脫落現(xiàn)象明顯減輕，血管內(nèi)皮細(xì)胞完整并連續(xù)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD62p結(jié)果表明，用藥組血小板CD62p水平明顯下降，說(shuō)明L.u溶栓酶抑制血小板的活化。ELISA檢測(cè)結(jié)果表明，與模型組相比，用藥組血清NOS、iNOS、eNOS、Renin、Ang-Ⅱ和ET-1水平明顯下降。用藥組明顯抑制乙醇誘導(dǎo)引起的SOD和T-