榆干離褶傘溶栓酶對乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷的保護作用研究.pdf

1、目的:研究榆干離褶傘（L.u）溶栓酶對乙醇誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞損傷的保護作用及抗血小板的作用。
　　方法:(1)細胞實驗:用200μmol/L乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞氧化損傷后，利用MTT法檢測L.u溶栓酶對內(nèi)皮細胞存活率;檢測細胞上清液LDH活性;AO/EB雙染法觀察內(nèi)皮細胞的凋亡;流式細胞儀檢測細胞的線粒體跨膜電位和總活性氧的含量;Western bolt方法觀察Caspase-8、Caspase-9、Cleaved Caspase-3

2、、細胞色素C蛋白的表達;(2)動物實驗:40％乙醇誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞損傷大鼠模型，HE染色觀察頸動脈形態(tài)學(xué)變化;流式細胞儀檢測血小板CD62p水平;ELISA法測定血清Ang-Ⅱ、ET-1、Renin、NOS、iNOS、eNOS水平;測定血清SOD、MDA、T-AOC和NO水平。
　　結(jié)果:(1)細胞實驗:MTT結(jié)果表明，L.u溶栓酶對乙醇誘導(dǎo)的氧化損傷有保護作用;與模型組相比，用藥組細胞上清液的LDH活性下降;AO/EB染色結(jié)果顯示，

3、模型組內(nèi)皮細胞固縮成圓狀且呈橘黃色，部分細胞胞漿出現(xiàn)空泡狀結(jié)構(gòu)，且出現(xiàn)紅染結(jié)構(gòu)，用藥后內(nèi)皮細胞紅染結(jié)構(gòu)逐漸消失，凋亡細胞減少，細胞形態(tài)逐漸恢復(fù)正常結(jié)構(gòu);流式細胞儀檢測線粒體跨膜電位和總活性氧結(jié)果表明，與模型組相比用藥組的線粒體跨膜電位明顯升高，而細胞內(nèi)活性氧含量明顯下降;Western bolt結(jié)果表明，與模型組相比，用藥組明顯減少細胞色素C、Cleaved Caspase3、蛋白的表達，增加Caspase8、Caspase9蛋白表達。

4、(2)動物實驗，HE染色結(jié)果顯示:乙醇誘導(dǎo)損傷后血管嚴(yán)重收縮，血管內(nèi)皮細胞層斷續(xù)，內(nèi)皮細胞脫落明顯;用藥組血管收縮程度減少，內(nèi)皮細胞脫落現(xiàn)象明顯減輕，血管內(nèi)皮細胞完整并連續(xù)。流式細胞儀檢測CD62p結(jié)果表明，用藥組血小板CD62p水平明顯下降，說明L.u溶栓酶抑制血小板的活化。ELISA檢測結(jié)果表明，與模型組相比，用藥組血清NOS、iNOS、eNOS、Renin、Ang-Ⅱ和ET-1水平明顯下降。用藥組明顯抑制乙醇誘導(dǎo)引起的SOD和T-