小麥條銹菌生理小種RAPD體系優(yōu)化及CY32的SCAR標(biāo)記的建立.pdf

1、小麥條銹病是危害最嚴(yán)重的小麥流行性病害之一。由于條銹菌生理小種的變異，常常造成大面積推廣品種“喪失”抗銹性，導(dǎo)致條銹病的大流行。研究表明條銹菌新小種的產(chǎn)生和發(fā)展是引致小麥抗病性喪失的主要原因。因而，監(jiān)測(cè)小麥條銹菌生理小種的類型及小種組成的變化對(duì)于小麥條銹病的綜合防治及抗病品種的選育具有重要的實(shí)際意義。小麥條銹菌屬專性寄生菌，其遺傳特征十分復(fù)雜，至今未發(fā)現(xiàn)其有性世代，不能人工培養(yǎng)。常規(guī)的生理小種鑒定的方法繁雜、費(fèi)工費(fèi)時(shí)，準(zhǔn)確性易受到鑒定條

2、件的影響；同時(shí)，由于鑒別寄主的數(shù)目相對(duì)有限，很難區(qū)分、鑒定出發(fā)生頻率低的小種(致病類型)以及混雜在其它小種內(nèi)的致病類型。這些都嚴(yán)重制約了條銹菌群體生物學(xué)的研究。 分子生物學(xué)的發(fā)展為監(jiān)測(cè)各地生理小種的組成及變異動(dòng)態(tài)提供了新的方法。鑒于小麥條銹菌是?；约纳形窗l(fā)現(xiàn)其有性階段，本文擬采用RAPD技術(shù)，通過揭示小麥條銹菌生理小種間及生理小種內(nèi)的遺傳多樣性，尋找主要流行小種的特異性分子標(biāo)記，從而為建立具有實(shí)用價(jià)值的中國小麥條銹菌生理

3、小種的快速分子檢測(cè)體系奠定基礎(chǔ)。本文取得了以下主要結(jié)果： 對(duì)小麥條銹菌的RAPD反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，建立了適用于小麥條銹菌的標(biāo)準(zhǔn)化RAPD反應(yīng)體系。多批次的擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)證明該反應(yīng)體系的穩(wěn)定性好，重復(fù)性強(qiáng)。 選用了99條10堿基隨機(jī)引物，發(fā)現(xiàn)其中51條引物可以得到穩(wěn)定清晰的擴(kuò)增圖譜。對(duì)中國小麥條銹菌12個(gè)主要生理小種的單孢菌系進(jìn)行的RAPD分析表明：中國小麥條銹菌各生理小種間的遺傳變異豐富，但一些基因組區(qū)段仍具有一定的保守性。

4、而生理小種內(nèi)不同單孢分離系間沒有RAPD譜型的差異，生理小種內(nèi)的遺傳基礎(chǔ)相對(duì)一致。 尋找到了條中32號(hào)的特異性RAPD標(biāo)記，并進(jìn)行了單孢菌系的驗(yàn)證。通過對(duì)條中32號(hào)特異RAPD片段的回收、克隆和測(cè)序，設(shè)計(jì)了兩對(duì)特異PCR引物，成功獲得條中32號(hào)小種?；腟CAR標(biāo)記。 上述結(jié)果表明通過大規(guī)模尋找小麥條銹菌生理小種的特異性RAPD片段，可以建立起中國小麥條銹菌流行生理小種的分子鑒定、檢測(cè)體系，簡(jiǎn)化常規(guī)鑒定的繁瑣程序，縮短鑒