小麥葉銹菌候選效應(yīng)蛋白基因在12個(gè)生理小種中的表達(dá)分析.pdf

1、小麥葉銹病是由小麥葉銹菌（Puccinia triticina）引起的在世界各小麥主產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生的一種重要真菌性病害，其對(duì)小麥的安全生產(chǎn)造成了嚴(yán)重影響。小麥葉銹菌是一種專性活體寄生真菌，通過(guò)吸器吸收養(yǎng)分，其分泌的效應(yīng)蛋白在小麥葉銹菌的致病性方面起著重要作用。因此，小麥葉銹菌效應(yīng)蛋白的研究對(duì)于更好的理解小麥葉銹菌的致病機(jī)制具有重要意義。本試驗(yàn)利用半定量RT-PCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)初步明確了候選效應(yīng)蛋白基因在小麥葉銹菌不同生理小種及

2、其侵染階段的表達(dá)模式，并對(duì)部分基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序與生物信息學(xué)分析，為后續(xù)小麥葉銹菌致病機(jī)制及其與寄主的互作機(jī)制的研究奠定基礎(chǔ)。本文主要研究結(jié)果如下:
　　1、所選用的10個(gè)基因引物中，除Pt70外，均能在12個(gè)生理小種的基因組DNA中檢測(cè)出清晰穩(wěn)定條帶，擴(kuò)增片段均大于目的擴(kuò)增片段。10個(gè)引物在12個(gè)小種cDNA中均擴(kuò)增出目的片段，引物Pt3、Pt12、Pt27、Pt51、Pt63、Pt68和Pt71擴(kuò)增的結(jié)果與在BBBD小種中的

3、結(jié)果基本一致;引物Pt58擴(kuò)增片段比BBBD擴(kuò)增片段小約100bp;引物Pt69擴(kuò)增片段比BBBD擴(kuò)增片段小約400bp;引物Pt70擴(kuò)增片段比目的片段大約450bp。
　　2、半定量RT-PCR對(duì)10個(gè)基因在12個(gè)不同小麥葉銹菌生理小種的夏孢子、萌發(fā)芽管和侵染階段不同時(shí)間點(diǎn)樣品中的表達(dá)分析表明，Pt12、Pt27、Pt58、Pt63和Pt69在各階段表達(dá)無(wú)差異，Pt3、Pt51、Pt68、Pt70和Pt71均在侵染階段表現(xiàn)出誘導(dǎo)

4、表達(dá)的趨勢(shì)。其中Pt3和Pt71僅在侵染階段誘導(dǎo)表達(dá)，在夏孢子與萌發(fā)芽管中幾乎無(wú)表達(dá);Pt51和Pt68除在侵染階段誘導(dǎo)表達(dá)外，在夏孢子和萌發(fā)芽管中也存在表達(dá);Pt70在夏孢子和芽管中存在表達(dá)，在侵染階段的表達(dá)呈先下降后升高的趨勢(shì)。
　　3、在半定量RT-PCR基礎(chǔ)上，選取Pt3、Pt51、Pt68、Pt70和Pt71這5個(gè)基因?qū)ζ湓?個(gè)小種PTHH、THTT、THJT、THGT、PHJT和KHKT中進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，結(jié)果與

5、半定量RT-PCR結(jié)果基本一致。Pt3、Pt51和Pt71這3個(gè)基因在夏孢子和萌發(fā)芽管中幾乎無(wú)表達(dá)，其中Pt3和Pt71在侵染階段早期即開(kāi)始誘導(dǎo)表達(dá)，而Pt51則在侵染后期大量誘導(dǎo)表達(dá);Pt68在各階段均存在表達(dá)，在后期表達(dá)量顯著增加;Pt70在萌發(fā)芽管及侵染前期的表達(dá)量要顯著高于后期表達(dá)量。另外，這些基因在不同小種中的表達(dá)模式也存在差異。
　　4、獲得了Pt3、Pt51、Pt68、Pt70和Pt71基因的cDNA序列，DNAMA