原發(fā)性肝癌的肝干細(xì)胞起源和誘導(dǎo)調(diào)控因素的初步研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌的發(fā)生曾歸因于成熟細(xì)胞的“去分化(dedifferentiation)”，但是，近年米研究認(rèn)為它可能由肝干細(xì)胞(hepaticstemcell，HSC)分化不全或分化異常(disdifferentiation)所致。肝干細(xì)胞是一類具有長期自我更新和多向分化能力的細(xì)胞，除了來源于以肝內(nèi)卵圓細(xì)胞(hepaticovalcell，HOC)為代表的原始細(xì)胞外，還可以來源于骨髓或外周循環(huán)系統(tǒng)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。肝干細(xì)胞在損傷修復(fù)中有重要作用，

2、但是它也可以發(fā)生分化異常而導(dǎo)致肝癌，并在一定時期內(nèi)延續(xù)肝干細(xì)胞的免疫標(biāo)志。肝干細(xì)胞的激活、增殖和分化由組織微環(huán)境所決定，而機(jī)體內(nèi)必然含有相關(guān)調(diào)控因子，并對干細(xì)胞米源的腫瘤的分化發(fā)生影響。本課題就原發(fā)性肝癌中肝干細(xì)胞的特征和肝癌的誘導(dǎo)調(diào)控條件進(jìn)行初步探討，旨在為原發(fā)性肝癌病理診斷、分子靶向治療和誘導(dǎo)分化治療，以及預(yù)后評估等提供理論依據(jù)。 實驗第一部分應(yīng)用HE染色、免疫組化方法觀察53例原發(fā)性肝癌，另用5例肝硬化和4例正常肝組織為對

3、照；同時，應(yīng)用透射電鏡觀察6例肝細(xì)胞癌、1例膽管癌、4例肝硬化和4例正常肝組織。結(jié)果發(fā)現(xiàn)①在原發(fā)性肝癌組織中觀察到肝干細(xì)胞(卵圓細(xì)胞)并向肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化；②肝細(xì)胞癌和肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌對CK7、CK19、c-kit、Thy-1、AFP等干細(xì)胞免疫標(biāo)志均有不同程度的表達(dá)。③觀察到小細(xì)胞型、中間型和假腺管型肝細(xì)胞癌均缺乏分化且干細(xì)胞免疫標(biāo)志表達(dá)較強(qiáng)。 實驗第二部分在體外培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系HepG2細(xì)胞，使用不同劑量的胎肝細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

4、的培養(yǎng)上清和白血病血清進(jìn)行生長干預(yù)，應(yīng)用倒置顯微鏡、電子顯微鏡、免疫組化、流式細(xì)胞儀和RT-PCR等技術(shù)和方法，觀察分析HepG2細(xì)胞表型特征，以及條件培養(yǎng)液對肝癌細(xì)胞生長的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)①肝癌細(xì)胞系HepG2表達(dá)CK7、CK19、AFP、vimentin、c-kit、Thy-1、CD34干細(xì)胞免疫標(biāo)志物及相應(yīng)的mRNA。②胎肝上清培養(yǎng)組，HepG2細(xì)胞生長受抑，分化提高，生長分?jǐn)?shù)隨劑量增加而降低。③骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清和白血病血清

5、培養(yǎng)組，HepG2細(xì)胞生長速度加快，生長分?jǐn)?shù)隨劑量增加而升高。 結(jié)論1.在成體肝癌和癌旁組織中有以卵圓細(xì)胞為代表的肝干細(xì)胞的活化，原發(fā)性肝癌的發(fā)生可能與肝干細(xì)胞的分化受阻和(或)分化異常有關(guān)。 2.原發(fā)性肝癌中肝干細(xì)胞可能是多源性的，既有肝內(nèi)米源，又有骨髓或外周循環(huán)系統(tǒng)來源。 3.原發(fā)性肝癌組織細(xì)胞類型多樣化，可能是由肝干細(xì)胞的異質(zhì)性和分化受阻程度不一所致。 4.肝癌細(xì)胞系HepG2具有干細(xì)胞表型特征，進(jìn)