體外轉(zhuǎn)染癌基因的骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分化為原發(fā)性肝癌的研究.pdf

1、背景:原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)是我國(guó)常見的惡性腫瘤之一，其死亡率在所有惡性腫瘤中居第三位。長(zhǎng)期以來，人們一直在尋找HCC的細(xì)胞源和病因，試圖從HCC的發(fā)病機(jī)制中找到一種行之有效的預(yù)防和治療手段。在HCC的細(xì)胞源研究中，主要有兩種觀點(diǎn)：其一為肝內(nèi)干細(xì)胞即卵圓細(xì)胞的異常分化引起；其二為成熟的肝細(xì)胞去分化而致。兩種觀點(diǎn)各有一定的支持依據(jù)。Sell-s在煙曲霉素B1(FB1)對(duì)小鼠的誘癌實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，肝組織內(nèi)首先出現(xiàn)大片肝細(xì)胞壞死，卵圓細(xì)胞增生，

2、卵圓細(xì)胞數(shù)量快速增加，在卵圓細(xì)胞中出現(xiàn)癌基因c-myc和AFPmRNA陽性反應(yīng)，TGF-α和TGF-BmRNA也呈陽性反應(yīng)，并呈逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)，以后卵圓細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，致癌基因的表達(dá)也隨之下降，噬堿性肝細(xì)胞結(jié)節(jié)形成，最后形成癌結(jié)節(jié)，認(rèn)為卵圓細(xì)胞在致癌因素的誘導(dǎo)下，可直接異常分化成癌細(xì)胞。由此，許多學(xué)者認(rèn)為肝內(nèi)卵圓細(xì)胞才是HCC的源細(xì)胞。Johnson-JD等在研究甲基丁香油酚這一致癌物質(zhì)對(duì)大鼠各臟器的損傷作用時(shí)發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)了肝癌、膽管

3、癌、神經(jīng)內(nèi)分泌惡性腫瘤、含鐵血黃素沉著癥、幼紅細(xì)胞增多癥、骨髓增生等多種疾病。同時(shí)有文獻(xiàn)報(bào)道在人類含鐵血黃素沉著癥的患者中，HCC為高發(fā)人群。一個(gè)致癌物質(zhì)能誘發(fā)多臟器癌變，究其原因，可能在于骨髓干細(xì)胞，基因變異的干細(xì)胞異常分化，隨血液循環(huán)到各臟器而導(dǎo)致多臟器癌變。如果骨髓干細(xì)胞基因變異可導(dǎo)致多臟器的癌變的假設(shè)正確的話，則骨髓干細(xì)胞就應(yīng)該是肝內(nèi)卵圓細(xì)胞的母細(xì)胞。Petersen-BE等先用大劑量放射線破壞雌性Ⅰ大鼠骨髓干細(xì)胞，然后行同類雄

4、性大鼠骨髓移植，術(shù)后喂食2-乙酰氨基芴(2-AAF)以抑制肝細(xì)胞的增生；術(shù)后第13天發(fā)現(xiàn)肝組織內(nèi)有少量的肝細(xì)胞和卵圓細(xì)胞呈Y染色體陽性表達(dá)。Malcolm-RA等對(duì)接受男性骨髓細(xì)胞移植的女性患者的肝組織進(jìn)行了病檢，發(fā)現(xiàn)有0.5％-2％肝細(xì)胞Y染色體呈陽性表達(dá)。以上研究證實(shí)肝組織內(nèi)肯定有部分卵圓細(xì)胞來自骨髓干細(xì)胞。由此，許多學(xué)者認(rèn)為肝內(nèi)卵圓細(xì)胞才是HCC的源細(xì)胞。而同時(shí)也有研究顯示，卵圓細(xì)胞表達(dá)某些骨髓干細(xì)胞的相關(guān)性抗原，卵圓細(xì)胞可能來源

5、于骨髓干細(xì)胞。這些實(shí)驗(yàn)證據(jù)使人們聯(lián)想到是否骨髓干細(xì)胞才是HCC的源細(xì)胞。在這方面，目前尚未有系統(tǒng)研究的報(bào)告，為此，本課題得到了廣東省自然科學(xué)基金支持。 目的:分離純化一個(gè)類群的骨髓干細(xì)胞，在體內(nèi)、外觀察轉(zhuǎn)染癌基因的骨髓干細(xì)胞分化和在大鼠肝臟定居情況，探討HCC的骨髓干細(xì)胞源性，為HCC的發(fā)生、發(fā)展的干細(xì)胞源性提供理論依據(jù)。 結(jié)論: 1.采用梯度離心的方法分離可獲得純度較高的骨髓間質(zhì)于細(xì)胞。每天更換培養(yǎng)液比每隔3-

6、4天換液一次更有利于MSC的增殖和形成形態(tài)均一的細(xì)胞集落。 2.大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞與肝細(xì)胞共同培養(yǎng)，可被誘導(dǎo)分化為肝細(xì)胞。 3.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在較高濃度的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的誘導(dǎo)下，可分化為肝細(xì)胞。 4.大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞，經(jīng)不同途徑移植均可于同種異體大鼠肝臟內(nèi)定居。植入的MSCs是肝臟卵圓細(xì)胞的細(xì)胞來源，并且可以分化為成熟的肝細(xì)胞。干細(xì)胞定居于肝臟的聚集時(shí)間、數(shù)量與肝臟是否受損傷關(guān)系密切，與移植途徑無關(guān)。