骨髓源性成體干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)化為心肌樣細(xì)胞的研究.pdf

1、目的：本研究探討骨髓源性的成體干細(xì)胞體外在5-氮胞苷、中藥三七皂甙的誘導(dǎo)下轉(zhuǎn)化為心肌樣細(xì)胞的可行性，并將骨髓干細(xì)胞與心肌細(xì)胞共培養(yǎng)，探討“心肌樣”微環(huán)境對(duì)這一轉(zhuǎn)化過(guò)程的影響。 方法：一.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(marrowmesenchymalstemcells，MSCs)體外誘導(dǎo)分化為心肌樣細(xì)胞 1.體外分離、培養(yǎng)SD大鼠MSCs。 2.分別用不同濃度的5-氮胞苷(5-azacytidine，5-aza)對(duì)MSCs定

2、向誘導(dǎo)，觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；在培養(yǎng)3周時(shí)，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色的方法檢測(cè)細(xì)胞中的心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)；用RT-PCR對(duì)心肌肌球蛋白重鏈(β-MHC)進(jìn)行鑒定；及電鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。取SD大鼠心肌細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照，未經(jīng)5-氮胞苷誘導(dǎo)正常培養(yǎng)的MSCs作為陰性對(duì)照。 3.體外，分別將MSCs經(jīng)5-氮胞苷誘導(dǎo)后與心肌細(xì)胞(cardiomyocyte，CM)共培養(yǎng)；MSCs經(jīng)5-氮胞苷誘導(dǎo)后與破碎心肌細(xì)胞共培養(yǎng)；MSCs直

3、接與心肌細(xì)胞共培養(yǎng)；MSCs直接與破碎心肌細(xì)胞共培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，并將培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 4中藥三七皂甙定向誘導(dǎo)MSCs分化為心肌樣細(xì)胞。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)；免疫細(xì)胞化學(xué)法鑒定cTnT；用RT-PCR對(duì)心肌肌球蛋白重鏈(β-MHC)進(jìn)行鑒定。取培養(yǎng)的SD大鼠心肌細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照，未經(jīng)三七皂甙誘導(dǎo)正常培養(yǎng)的MSCs作為陰性對(duì)照。 二.CD34+造血干細(xì)胞“心肌樣”微環(huán)境中分化為心

4、肌樣細(xì)胞 1.在體外分離、培養(yǎng)CD34+造血干細(xì)胞。 2.將CD34+造血干細(xì)胞與分離出的新生乳鼠心肌細(xì)胞共培養(yǎng)。將新生乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境模擬為在體心肌細(xì)胞的生活環(huán)境即心肌樣微環(huán)境。在倒置顯微鏡下觀察CD34+造血干細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)論：1.MSCs是骨髓來(lái)源的具有多向分化潛能的干細(xì)胞，在5-氮胞苷的定向誘導(dǎo)下，可以向心肌樣細(xì)胞分化，有望成為心衰及心肌梗死等心肌損傷時(shí)干細(xì)胞移植治療的理想細(xì)胞材料。 2