骨髓源性成體干細胞體外轉(zhuǎn)化為心肌樣細胞的研究.pdf

1、目的：本研究探討骨髓源性的成體干細胞體外在5-氮胞苷、中藥三七皂甙的誘導下轉(zhuǎn)化為心肌樣細胞的可行性，并將骨髓干細胞與心肌細胞共培養(yǎng)，探討“心肌樣”微環(huán)境對這一轉(zhuǎn)化過程的影響。 方法：一.骨髓間充質(zhì)干細胞(marrowmesenchymalstemcells，MSCs)體外誘導分化為心肌樣細胞 1.體外分離、培養(yǎng)SD大鼠MSCs。 2.分別用不同濃度的5-氮胞苷(5-azacytidine，5-aza)對MSCs定

2、向誘導，觀察細胞形態(tài)學變化；在培養(yǎng)3周時，用免疫細胞化學染色的方法檢測細胞中的心肌特異性肌鈣蛋白T(cTnT)；用RT-PCR對心肌肌球蛋白重鏈(β-MHC)進行鑒定；及電鏡下觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。取SD大鼠心肌細胞作為陽性對照，未經(jīng)5-氮胞苷誘導正常培養(yǎng)的MSCs作為陰性對照。 3.體外，分別將MSCs經(jīng)5-氮胞苷誘導后與心肌細胞(cardiomyocyte，CM)共培養(yǎng)；MSCs經(jīng)5-氮胞苷誘導后與破碎心肌細胞共培養(yǎng)；MSCs直

3、接與心肌細胞共培養(yǎng)；MSCs直接與破碎心肌細胞共培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化，并將培養(yǎng)細胞進行雙標免疫細胞化學檢測。 4中藥三七皂甙定向誘導MSCs分化為心肌樣細胞。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)；免疫細胞化學法鑒定cTnT；用RT-PCR對心肌肌球蛋白重鏈(β-MHC)進行鑒定。取培養(yǎng)的SD大鼠心肌細胞作為陽性對照，未經(jīng)三七皂甙誘導正常培養(yǎng)的MSCs作為陰性對照。 二.CD34+造血干細胞“心肌樣”微環(huán)境中分化為心

4、肌樣細胞 1.在體外分離、培養(yǎng)CD34+造血干細胞。 2.將CD34+造血干細胞與分離出的新生乳鼠心肌細胞共培養(yǎng)。將新生乳鼠心肌細胞的培養(yǎng)環(huán)境模擬為在體心肌細胞的生活環(huán)境即心肌樣微環(huán)境。在倒置顯微鏡下觀察CD34+造血干細胞形態(tài)學變化。 結(jié)論：1.MSCs是骨髓來源的具有多向分化潛能的干細胞，在5-氮胞苷的定向誘導下，可以向心肌樣細胞分化，有望成為心衰及心肌梗死等心肌損傷時干細胞移植治療的理想細胞材料。 2