miR-16-1抑制A549細胞株生物學(xué)行為及非小細胞肺癌ARID1A基因表達的研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 miR-16-1抑制A549細胞株生物學(xué)行為的研究
　　目的:研究非小細胞肺癌 miR-16-1的表達以及miRNA-16-1抑制A549細胞株生物學(xué)行為,為進一步研究非小細胞肺癌與 miR-16-1的相互關(guān)系提供依據(jù)。
　　方法:以 A549肺癌細胞株和40例非小細胞肺癌病例為研究對象,應(yīng)用qRT-PCR檢測方法,比較肺癌組織和癌旁正常肺組織中miR-16-1的表達,研

2、究非小細胞肺癌與miR-16-1表達的關(guān)系;通過 lipofectamine2000轉(zhuǎn)染在細胞體內(nèi)有生物活性的has-miR-16-1 mimics,應(yīng)用qRT-PCR檢測轉(zhuǎn)染前后 miR-16-1的表達情況;應(yīng)用MTT、AnnexinV/FITC-PI流式細胞術(shù)、Transwell等方法檢測轉(zhuǎn)染 miR-16-1 mimics前后 A549細胞株的增殖、凋亡和侵襲性變化,研究 miR-16-1對 A549肺癌細胞株的生物學(xué)行為的影響。

3、
　　結(jié)果:40例肺癌組織和癌旁正常肺組織 miR-16-1表達的比較結(jié)果顯示,肺癌組織中miR-16-1的表達明顯低于癌旁正常肺組織 miR-16-1的表達,與癌旁正常肺組織比較,肺癌組織中miR-16-1的表達值平均只有癌旁正常肺組織的0.34倍,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05;A549轉(zhuǎn)染 hsa-miR-16-1 mimics后,細胞周期檢測結(jié)果顯示細胞阻滯在 G0-G1期,細胞的凋亡明顯增加,A549細胞侵襲性明顯降低,

4、并且 A549細胞的增殖活性降低。
　　結(jié)論:miR-16-1有抑制A549肺癌細胞株生長、增殖和侵襲的作用,增加 miR-16-1的表達可抑制腫瘤的進展,miR-16-1可能是治療肺癌的一個潛在靶點。
　　第二部分 非小細胞肺癌 ARID1A基因表達的研究
　　目的:研究 ARID1A在非小細胞肺癌以及A549細胞株中的表達,探討 ARID1A基因在非小細胞肺癌中的作用機制。
　　方法:以 A549肺癌細胞株和

5、40例非小細胞肺癌病例為研究對象,應(yīng)用免疫熒光和激光共聚焦技術(shù)檢測肺癌細胞株 A549中ARID1A的表達和定位情況;以 qRT-PCR技術(shù)檢測非小細胞肺癌中ARID1A的mRNA表達;通過 western blotting和免疫組化技術(shù)檢測 ARID1A的蛋白表達,探討非小細胞肺癌中ARID1A的表達與臨床病理特點之間的關(guān)系,從而闡明在非小細胞肺癌中ARID1A基因表達的臨床意義。
　　結(jié)果:本組實驗通過免疫熒光及共聚焦顯微鏡檢

6、測,結(jié)果發(fā)現(xiàn) ARID1A蛋白定位在細胞核,定位特異性高,在 A549肺癌細胞株中存在 ARID1A陽性表達。在40例非小細胞肺癌標本中,qRT-PCR檢測結(jié)果顯示 ARID1A的mRNA表達下降,與癌旁正常肺組織的比較,平均值為癌旁正常肺組織的0.63,p<0.05,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。western blotting檢查和免疫組化的結(jié)果發(fā)現(xiàn) ARID1A肺癌組織中存在表達缺失,通過對肺癌組織和癌旁正常肺組織的比較,肺癌組織 ARI