組胺H4受體在人類肥大細(xì)胞中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：組胺H4受體是近年來新發(fā)現(xiàn)的組胺受體，主要表達(dá)于免疫器官及免疫細(xì)胞上。研究表明，組胺H4受體參與多種免疫性疾病的免疫炎癥反應(yīng)并介導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等的炎癥反應(yīng)。肥大細(xì)胞膜表面有H4受體的分布，也是組胺的效應(yīng)細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)研究組胺H4受體對(duì)人肥大細(xì)胞系LAD2細(xì)胞表達(dá)炎癥因子IL-8、TNF-α的影響及其活化的信號(hào)通路，以初步探討H4受體通過肥大細(xì)胞參與免疫炎癥反應(yīng)的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法：1、人肥大

2、細(xì)胞系LAD2細(xì)胞的培養(yǎng)；2、通過組胺H4受體激動(dòng)劑Clobenpropit刺激肥大細(xì)胞脫顆粒及細(xì)胞因子IL-8、TNF-α分泌，觀察組胺H4受體激活對(duì)LAD2細(xì)胞生物學(xué)功能的影響；3、探討組胺H4受體的激活對(duì)Calcium-鈣調(diào)磷酸酶-NFAT、PI3K-Akt、MAPKs（JNK、P38及Erk）、NF-κB信號(hào)通路的影響。
　　結(jié)果：1、用組胺H4受體激動(dòng)劑Clobenpropit刺激人肥大細(xì)胞LAD2，不能引起LAD2細(xì)胞

3、脫顆粒，但引起LAD2細(xì)胞釋放IL-8和TNF-α；2、組胺H4受體激動(dòng)劑Clobenpropit刺激人肥大細(xì)胞LAD2，能引起鈣動(dòng)員，Erk、P38、JNK磷酸化，NFAT、NF-κB活化，但對(duì)Akt磷酸化沒有影響；3、PI3K抑制劑Wortmannin、Erk抑制劑PD98059、鈣調(diào)磷酸酶抑制劑Cyclosporin A能明顯抑制Clobenpropit刺激LAD2細(xì)胞引起的IL-8和TNF-α釋放，與此相反，P38抑制劑SB20

4、385能明顯促進(jìn)Clobenpropit刺激LAD2細(xì)胞分泌IL-8和TNF-α，JNK抑制劑SP600125級(jí)NF-κB抑制劑Bay11-7821對(duì)Clobenpropit刺激引起LAD2細(xì)胞釋放IL-8和TNF-α沒有影響。
　　結(jié)論：組胺H4受體激動(dòng)劑沒有引起LAD2細(xì)胞脫顆粒，但引起LAD2細(xì)胞炎癥因子IL-8及TNF-α的釋放，說明該受體可能與過敏反應(yīng)的遲發(fā)相有關(guān)。組胺H4受體激動(dòng)劑可以刺激LAD2細(xì)胞鈣動(dòng)員，并引起ER

5、K、JNK、NFAT的活化，加入相應(yīng)的抑制劑后炎癥因子釋放減少，說明其在人肥大細(xì)胞分泌炎癥因子的通路與Calcium-鈣調(diào)磷酸酶-NFAT及MAPKs（JNK、P38及Erk）信號(hào)通路途徑相關(guān)。組胺H4受體激動(dòng)劑能引起LAD2細(xì)胞P38活化，然而加入相應(yīng)的抑制劑后炎癥因子釋放增加，說明P38信號(hào)通路對(duì)組胺H4受體信號(hào)傳導(dǎo)有負(fù)調(diào)控作用。組胺H4受體激動(dòng)劑能引起LAD2細(xì)胞NF-κB活化，然而加入相應(yīng)的抑制劑后炎癥因子釋放無明顯變化，提示N