胃癌MG7-Ag模擬表位為基礎(chǔ)構(gòu)建多表位聯(lián)合的基因疫苗的研究.pdf

1、胃癌是嚴(yán)重威脅中國(guó)人民健康的惡性腫瘤,目前胃癌的治療手段主要有手術(shù)切除和化療,但均不能有效解決腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等問題.免疫治療是腫瘤治療的新方法,包括用外源性抗體治療、用細(xì)胞因子調(diào)節(jié)免疫以及主動(dòng)免疫治療,用疫苗對(duì)患者的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性刺激.目的 以HSP70為載體,GGGS為間隔序列,構(gòu)建含有4個(gè)串聯(lián)的MG7-Ag模擬表位與HSP70的融合基因疫苗,并觀察該疫苗能否誘導(dǎo)BALB/c小鼠產(chǎn)生特異性體液免疫、細(xì)胞免疫及其體內(nèi)抗瘤效應(yīng).檢測(cè)胃

2、癌組織中趨化因子受體CXCR3的表達(dá)水平.方法1.將4個(gè)不同的胃癌MG7-Ag模擬表位依次設(shè)計(jì)于下游引物中,通過多次PCR將表位串聯(lián)于一段無關(guān)的載體基因,將目的基因插入PMD-18T載體,酶切鑒定,測(cè)序后,利用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ將基因亞克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3.1B載體,HindⅢ酶切除無關(guān)載體基因,用EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ將熱休克蛋白基因插入表位之后作為佐劑,得到多表位串聯(lián)的DNA疫苗.采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法將重組質(zhì)粒瞬

3、時(shí)轉(zhuǎn)染至小鼠骨髓瘤SP2/0細(xì)胞.Western blotting鑒定重組蛋白4MG7-HSP70的表達(dá)2.pcDNA3.1B/4MG7-HSP70基因疫苗采用肌肉注射和靜脈注射兩種方式免疫接種BALB/c小鼠,每隔2周加強(qiáng)免疫一次,共免疫3次.以生理鹽水、空載體質(zhì)粒、pcDNA3.1(+)/HSP70質(zhì)粒和pcDNA3.1(+)/1MG-HSP70質(zhì)粒為對(duì)照.分別于初次免疫后2、4、6周收集血清,進(jìn)行ELISA.第6周時(shí)取小鼠脾細(xì)胞,