hpv6bl139;△ebvlmp2多表位嵌合核酸疫苗的構建、表達和免疫效應研究

1、溫州醫(yī)學院碩士學位論文HPV6bL1/EBV LMP2多表位嵌合核酸疫苗的構建、表達和免疫效應研究姓名：劉建曉申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：張麗芳;夏克棟20100501溫州醫(yī)學院碩{ ：學位論文和嵌合重組質粒p c D N A 3 ．1 ( + ) ／H P V 6 b L l △／E B VL M P 2 多表位免疫B A L B ／c 小鼠，每次l O O “g ／1 0 0 p lP B S ／R ，同時設置對照組

2、P B S 組、p c D N A 3 ．1 ( + ) 組、p c D N A 3 ．0 ( + ) ／H P V 6 b L l△組和p c D N A 3 ．0 ( + ) ／H P V 6 b L l △+ p c D N A 3 ．I ( + ) ／E B VL M P 2 多表位聯(lián)合組，通過E L I S A ，C T L 細胞殺傷活性檢測和細胞內細胞因子檢測等，分析重組質粒p c D N A 3 ．I ( + ) ／E B

3、 VL M P 2 多表位和嵌合重組質粒p c D N A 3 ．1 ( + ) H - I P V 6 b L l △／E B VL M P 2多表位誘導機體產生的體液免疫和細胞免疫效應。結果：1 - 經酶切分析和測序證實多表位重組質粒p c D N A 3 ．I ( + ) ／E B V L M P 2 多表位構建成功；轉染C O S ．7 細胞后，經R T - P C R 和間接免疫熒光證實了該多表位質粒在C O S ．7 細胞的

4、m R N A 轉錄和蛋白的表達，且定位于胞漿。2 ．經P C R ，酶切及測序鑒定嵌合重組質粒p c D N A 3 ．1 ( + ) ／H P V 6 b L l △／E B VL M P 2 多表位構建成功；轉染C O S 一7 細胞后，經R T - P C R ，間接免疫熒光和W e s t e r nB l o t 分析，均證實了其可以在真核細胞中表達，，且主要定位于胞漿，呈不均勻顆粒狀。電鏡觀察顯示細胞胞漿中有5 0 ．6

5、0 n m 的病毒樣顆粒形成，提示嵌合重組質粒p c D N A 3 ．I ( + ) ／H P V6 b L l △／E B V L M P 2 多表位可在真核細胞胞漿表達，且不影響H P V 6 b L l 病毒樣顆粒的組裝。3 ．E B VL M P 2 多表位重組質粒誘導B A L B ／c 小鼠產生的血清抗體經W e s t e r nb l o t 驗證能特異性識別E B V L M P 2 多表位蛋白和E B V 膜蛋白；

6、p c D N A 3 ．I ( + ) m B V L M P 2 多表位和p c D N A 3 ．I ( + ) ／H P V 6 b L l △／E B VL M P 2 多表位免疫B A L B ／c 小鼠后，E L I S A 結果顯示其能產生對p E T 3 2 a ／E B V L M P 2 多表位的特異性I g G ( 末次免疫后一周達峰值，與對照組p c D N A 3 ．1 ( + ) 組和P B S 組比較，有

7、顯著性差異，p < O ．0 5 ) 和s I g A ( 末次免疫后一周達峰值，與對照組p c D N A 3 ．1 ( + ) 組和P B S 組比較，有顯著性差異，p < 0 ．0 5 ) ，也能產生對E B V 膜蛋白的特異性I g G ，且在末次免疫后1 周達到峰值；p c D N A 3 ．1 ( + ) ／H P V 6 b L l △／E B VL M P 2 多表位組還可以產生抗H P V 6 b L l

8、V L P 的特異性I g G 抗體( 與對照組比較均有顯著性差異p < 0 ．0 5 ) ，與p c D N A 3 ．O ( + ) ／H P V6 b L l △+ p c D N A 3 ．I ( + ) ／E B VL M P 2 多表位聯(lián)合組比較無統(tǒng)計學意義；C T L 細胞活性檢測結果顯示小鼠核酸免疫后能產生對靶細胞的特異性殺傷作用，并隨效靶比( E f t ) 的增高殺傷率也增高，與對照組p c D N A 3 ．