定量免疫PCR檢測血清MG7-Ag新方法的建立及其意義.pdf

1、【背景】：胃癌是常見的消化道惡性腫瘤,在所有惡性腫瘤中，其死亡率排第二位，早期發(fā)現(xiàn)和診斷胃癌對胃癌的治療和預后至關重要。以往的胃癌標志物如CEA、CA50等對胃癌診斷的敏感性和特異性均較差，早期診斷受到限制。因此尋找新的組織學、細胞學、血清學胃癌特異性抗原對胃癌的診斷和治療具有重大意義。
　　本實驗室樊代明教授在上世紀八十年代研制出的一系列特異性較好的胃癌單克隆抗體，并命名為MG系列[1]，其對胃癌的敏感性和特異性均較高，尤其以M

2、G7最引人關注。本室相繼建立了血清學檢測MG7抗原的ELISA方法和免疫PCR方法，使胃癌早期診斷的敏感性和特異性得到極大提高。由于免疫PCR是通過瓊脂糖凝膠電泳對PCR終產物是進行半定量的檢測，不能實現(xiàn)精確定量，特異性受到限制。將實時定量PCR技術應用于免疫PCR，通過實時定量PCR反應過程中原始模板量的變化分析胃癌患者血清中MG系列抗原含量，使血清抗原含量得以實現(xiàn)精確定量,本研究以期通過定量免疫PCR技術實現(xiàn)對血清中MG7-Ag的精

3、確定量檢測，有望為胃癌的診斷新的方法學依據(jù)。
　　【目的】：建立以定量免疫PCR檢測血清胃腫瘤相關MG7-Ag的新方法，分析血清中MG7-Ag的含量，通過確定胃癌患者與健康人群血清中MG7-Ag的相對含量，為胃癌血清診斷提供支持。
　　【方法】：1.通過細胞培養(yǎng)技術復蘇MG7雜交瘤細胞和MGb2雜交瘤細胞，制備MG7單抗和MGb2單抗。2.以光敏生物素標記MG7單抗和質粒。3.應用實時定量免疫PCR技術檢測胃癌患者血清中MG

4、系列抗原含量。
　　【結果】：建立了定量免疫PCR方法，其穩(wěn)定性較好，對胃癌診斷的敏感性和特異性均較高。50μL血清MGAgs相對含量，胃癌組為21890±6579個MKN45細胞，健康對照組為2844±914個MKN45細胞，胃癌組與健康對照組兩組間存在明顯差異，P<0.01具有統(tǒng)計學意義
　　【結論】：以PCR管(聚丙烯材料)作為載體對MGb2抗體具備良好吸附性，非特異性較低，可以作為蛋白質載體進行免疫反應，同時，MGb