SAMP8小鼠血清雌激素水平及學習記憶相關腦區(qū)的增齡性變化.pdf

1、目的：應用SAMP8小鼠為研究對象，通過對不同月齡SAMP8小鼠學習記憶能力、血清雌激素水平以及海馬CA1區(qū)形態(tài)變化的觀察，研究其在自然衰老過程中血清雌激素水平與學習記憶能力和學習記憶相關腦區(qū)形態(tài)學的增齡性改變之間的關系，為SAMP8小鼠老化特征及阿爾茨海默病的雌激素替代治療補充新的實驗數(shù)據(jù)。
　　 方法：選取健康雌性3、6、9月齡的SAMP8小鼠各8只，（簡稱P8③組、P8⑥組、P8⑨組）。選取健康雌性3、6、9月齡的SAMR

2、1小鼠各8只作同源對照組，（簡稱R1③組、R1⑥組、R1⑨組）。在正常條件下飼養(yǎng)。
　　 1.Morris水迷宮實驗：將小鼠在水迷宮實驗室環(huán)境下飼養(yǎng)1天，以熟悉實驗環(huán)境。從第2天開始進行實驗。實驗在每天上午進行。第2至第5天先進行定位航行實驗：將Morris水迷宮均分為4個象限，平臺放入其中1個象限中。小鼠自第一象限中點面向池壁入水，視頻采集系統(tǒng)跟蹤并記錄找到平臺所需的時間。第5天撤掉平臺進行探索試驗，記錄小鼠120s內(nèi)跨越平臺

3、的次數(shù)。
　　 2.血清雌激素(E2)水平檢測：在小鼠處于動情間期時給予6％水合氯醛腹腔注射麻醉，暴露胸腔，剪開右心耳收集血液。離心取上清，用放射免疫方法檢測E2。
　　 3.組織切片制備及觀察：小鼠給予6％水合氯醛腹腔注射麻醉，暴露胸腔，將輸液針刺入左心室，同時剪開右心耳，用生理鹽水快速沖洗，4％多聚甲醛灌注。自上丘至視交叉節(jié)段取腦組織，制備石蠟切片兩套。分別用于HE染色和抗Aβ免疫組化染色觀察。
　　 4.透

4、射電鏡標本制備及觀察：小鼠給予6％水合氯醛腹腔注射麻醉，生理鹽水快速沖洗，用3％多聚甲醛-1％戊二醛混合溶液灌注，取鼠腦，游離海馬，置于4％預冷的戊二醛溶液中固定，將標本切成厚約1mm的橫斷薄片，1h后再次切成＜1mm3的組織塊，鋨酸固定，脫水，樹脂包埋，LKB-5超薄切片機切片，厚度50nm。醋酸鈾一檸檬酸鉛染色，透射電鏡觀察。
　　 結果：
　　 1.Morris水迷宮實驗結果：定位航行試驗：P8⑥組逃避潛伏期長于P

5、8③組（P＜0.05），P8⑨組逃避潛伏期長于P8⑥組(P＜0.05);P8③組與同齡對照組R1③組相比差異無顯著性(P＞0.05），P8⑥組長于R1⑥組（P＜0.05），P8⑨組明顯長于R1⑨組(P＜0.01)。穿越實驗：P8⑥組跨越平臺次數(shù)少于P8③組(P＜0.05)，P8⑨組次數(shù)少于P8⑥組(P＜0.05);P8③組與同齡對照組R1③組相比差異無顯著性（P＞0.05），P8⑥組與R1⑥組相比差異亦無顯著性（P＞0.05），P8⑨組

6、跨越次數(shù)明顯少于R1⑨組(P＜0.01)。
　　 2.血清雌激素水平檢測結果：P8⑥組低于P8③組（P＜0.05），P8⑨組與P8⑥組相比明顯下降(P＜0.01);P8③組與R1③組E2水平相比無統(tǒng)計學意義(P＞0.1)，P8⑥組低于R1⑥組(P＜0.05)，P8⑨組與R1⑨組相比明顯下降(P＜0.01)。
　　 3.HE染色觀察結果：P8③組：CA1區(qū)錐體細胞層次排列整齊，細胞結構完整，核仁清晰。與對照組R1③組無明顯

7、區(qū)別；P8⑥組：CA1區(qū)錐體細胞較P8③組相對疏松，細胞數(shù)目有一定減少，但是結構尚完整；R1⑥組：與P8⑥組相比CA1區(qū)錐體細胞層次排列較整齊，細胞結構完整，核仁清晰；P8⑨組：CA1區(qū)細胞層次排列紊亂，細胞數(shù)目減少，大量錐體細胞濃染。R1⑨組：細胞數(shù)目有一定減少，排列稍顯疏松，但較P8⑨組整齊，結構完整。
　　 4.抗Aβ免疫組化染色結果：P8⑥組Aβ陽性神經(jīng)元數(shù)目和吸光度大于P8③組(P＜0.05)，P8⑨組大于P8⑥組(P

8、＜0.05);P8③組與R1⑧組Aβ陽性神經(jīng)元數(shù)目和吸光度無差別(P＞0.05），P8⑥組大于R1⑥組(P＜0.05)，P8⑨組明顯大于R1⑨組(P＜0.01)。
　　 5.透射電鏡觀察結果：P8③組：核仁完整，核膜清晰，染色質(zhì)均勻，線粒體等各細胞器結構完好。P8⑥組：核仁明顯，核膜雙層結構稍顯模糊，邊緣欠光滑，染色質(zhì)均勻，出現(xiàn)少量脂褐素，線粒體輕微腫脹。P8⑨組：核固縮，核膜結構模糊不清，染色質(zhì)邊集，大量脂褐素沉積，線粒體腫脹

9、。R1③組和R1⑥組與P8③組情況基本一致。R1⑨組：核仁完整，核膜清晰，個別細胞出現(xiàn)染色質(zhì)邊集，細胞器結構完好。
　　 結論：
　　 1.6月齡和9月齡的SAMP8小鼠的血清雌激素水平與同月齡SAMR1小鼠相比明顯下降。
　　 2.SAMP8小鼠學習記憶能力呈增齡性下降，與血清雌激素水平下降趨勢一致。
　　 3.SAMP8小鼠隨增齡海馬CA1區(qū)β樣淀粉蛋白沉積加重；神經(jīng)元排列愈加紊亂疏松，細胞腫脹變性程