IL-10基因干預對CCL4誘導的肝纖維化大鼠肝竇毛細血管化的作用研究.pdf

1、目的:
　　1.構建CCl4誘導的大鼠肝纖維化模型,觀察肝竇毛細血管化的形成過程。
　　2.探討IL-10基因干預對CCl4誘導的肝纖維化大鼠肝竇毛細血管化的影響。
　　方法:
　　1.選用56只清潔級雄性SD大鼠,完全隨機分為正常對照組(N組),肝纖維化模型組(M組),N組大鼠腹腔注射生理鹽水2ml/kg,M組大鼠腹腔注射50％CCl4-蓖麻油混合液2ml/kg,均每周2次,共8周;分別于造模第3天、1周、2周

2、、4周、6周、8周處死大鼠,收集肝組織和血清備用。HE染色、Masson染色觀察肝組織炎癥及纖維化程度,放射免疫法檢測血清中HA的含量,透射電鏡觀察肝竇竇壁結構,S-P免疫組織化學檢測各組大鼠肝臟CD31、LN、Col-IV的表達。
　　2.選用30只清潔級雄性SD大鼠,完全隨機分為正常對照組(N組),肝纖維化模型組(M組),rIL-10質粒治療組(I組),空質粒對照組(P組),造模方法同前(N組:生理鹽水,M、I、P組:50%C

3、Cl4-蓖麻油混合液);從第5周開始,N組和M組大鼠尾靜脈注射林格氏液作為試劑對照,I組大鼠尾靜脈注射pcDNA3-rIL-10質粒,P組大鼠尾靜脈注射pcDNA3.0空質粒,均每周一次。所有大鼠于實驗第8周末處死,收集肝組織和血清備用。生化檢測血清ALT和AST的含量,HE染色、Masson染色觀察肝組織炎癥及纖維化程度,放射免疫法檢測血清中肝纖維化相關指標(HA、LN、PCIII、Col-IV)的含量,透射電鏡觀察肝竇竇壁結構,S-

4、P免疫組織化學檢測各組大鼠肝臟CD31、LN、Col-IV的表達。
　　結果:
　　1.肝臟病理組織學證實CCL4誘導的大鼠肝纖維化模型構建成功,肝纖維化早期炎癥細胞浸潤、肝細胞變性壞死明顯,中后期以膠原沉積、纖維間隔形成為主,仍見肝細胞變性壞死,炎癥浸潤不明顯。
　　2.透射電鏡及免疫組化結果表明,在肝纖維化過程中,肝竇毛細血管化是逐漸形成的,LSECs失窗孔明顯早于纖維間隔的形成,而肝竇內皮下基底膜出現在纖維間隔形

5、成以后。
　　3.經過IL-10基因干預后,與M組和P組比較,I組大鼠肝細胞變性壞死程度減輕,中央靜脈周圍炎癥細胞浸潤減少,膠原纖維沉積明顯下降。I組血清ALT、AST、HA、LN、PCIII、Col-IV水平顯著降低(P<0.05),Masson染色顯示肝組織膠原纖維沉積明顯減少(P<0.05);透射電鏡顯示I組肝組織內膠原纖維沉積較前減少,變薄,有窗孔視野多見,BM變得不連續(xù)、不明顯,甚至部分視野可見窗孔,未見BM;免疫組化結