升丹制劑——五五丹外用對大鼠的腎毒性及毒性機(jī)制研究.pdf

1、目的：基于中醫(yī)理論，在前期研究的基礎(chǔ)上，根據(jù)臨床用藥模式，考察五五丹的毒性及其毒性機(jī)制，為臨床的安全用藥提供科學(xué)依據(jù)，進(jìn)而構(gòu)建符合中醫(yī)臨床特色的安全性評價(jià)模式。
　　 方法：通過對破損皮膚模型大鼠連續(xù)給予五五丹4周及停藥1周的毒性特征研究以及TUNEL法、免疫組織化學(xué)法等研究五五丹對腎臟細(xì)胞凋亡的影響，并進(jìn)一步檢測細(xì)胞凋亡過程中Bax/Bcl-2、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)(NF-κB)等相關(guān)蛋白表達(dá)變化以揭示其作用機(jī)理，為臨床安全用藥提供安全依

2、據(jù)。
　　 結(jié)果：五五丹高、中、低劑量組在給藥第7、21、28天時(shí)均引起大鼠腎臟系數(shù)顯著增加(*p＜0.05，**p＜0.01)。五五丹高劑量組在給藥第7、28天時(shí)均引起大鼠胸腺系數(shù)顯著下降(**p＜0.01)。五五丹高劑量組在給藥第14天時(shí)引起大鼠谷丙轉(zhuǎn)氨酶(*p＜0.05)及谷草轉(zhuǎn)氨酶(**p＜0.01)水平明顯升高。五五丹高劑量組在給藥第28天時(shí)引起大鼠尿素氮(**p＜0.01)水平明顯升高。
　　 五五丹大劑量應(yīng)

3、用后大鼠腎臟主要表現(xiàn)為腎小管腔明顯擴(kuò)張，上皮細(xì)胞明顯變性、壞死，多數(shù)大鼠腎小球無明顯改變。高劑量對腎臟的毒性作用1-2周時(shí)最明顯，以后隨著用藥時(shí)間的延長，毒性作用反而有所減輕。4周時(shí)腎臟的病變最輕，在恢復(fù)期出現(xiàn)修復(fù)性改變（腎小管再生）。對卵巢、子宮有一定的毒性作用，對睪丸生精有抑制作用。高劑量1周時(shí)引起皮質(zhì)部胸腺細(xì)胞壞死，2周～4周胸腺有輕度～中度萎縮，恢復(fù)期病變明顯減輕、胸腺的組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常。五五丹高劑量對腎臟組織的凋亡誘

4、導(dǎo)作用1-2周時(shí)最明顯，以后隨著用藥時(shí)間的延長，毒性作用減輕。五五丹在用藥4周，停藥恢復(fù)1周后，腎臟組織的凋亡程度明顯減輕。
　　 五五丹外用1-2周時(shí)即可引起B(yǎng)ax表達(dá)水平顯著性升高，同時(shí)Bcl-2表達(dá)水平明顯下降（*p＜0.05或**p＜0.01），以后隨著用藥時(shí)間的延長，其對Bax及Bcl-2蛋白表達(dá)的影響明顯減弱。
　　 五五丹外用1-2周時(shí)即可引起NF-κB表達(dá)水平顯著性升高(*p＜0.01),3-4周時(shí)仍處于

5、較高水平,5周時(shí)NF-κB表達(dá)水平明顯下降。
　　 結(jié)論：1．五五丹大劑量應(yīng)用對大鼠臟器有明顯的毒性表現(xiàn)。腎臟發(fā)生損害的形態(tài)學(xué)改變，主要表現(xiàn)為腎小管改變而多數(shù)大鼠腎小球無明顯改變。肝臟的功能雖受到損害，但肝臟的病理組織學(xué)改變卻不顯著。卵巢、子宮、睪丸、胸腺等器官有不同程度毒性損害。
　　 2．五五丹對腎毒性與用藥劑量呈正相關(guān)關(guān)系，即用藥劑量的加大，對腎臟的毒性作用增加；五五丹對腎毒性與用藥時(shí)間呈一定的相關(guān)關(guān)系，高劑量對腎

6、臟的毒性作用1-2周時(shí)最明顯，中劑量和低劑量2周時(shí)達(dá)高峰，此后減輕。五五丹在用藥4周，停藥恢復(fù)1周后，腎臟的病變程度明顯減輕，提示在本研究所使用的劑量和時(shí)間范圍內(nèi)腎功能可以恢復(fù)。
　　 3．五五丹引起的腎臟組織凋亡與用藥劑量和時(shí)間有密切關(guān)系，1-2周時(shí)最明顯，此后減輕。用藥4周，停藥恢復(fù)1周后，腎臟組織的凋亡程度明顯減輕，提示在所使用的劑量和時(shí)間范圍內(nèi)具有一定的可逆性。
　　 4．五五丹可通過調(diào)控Bax/Bcl-2凋亡相

7、關(guān)蛋白表達(dá)水平引起腎臟細(xì)胞凋亡，效應(yīng)具有一定的劑量效應(yīng)及時(shí)間效應(yīng)關(guān)系，2～3周時(shí)達(dá)高峰，具有一定的可逆性。提示機(jī)體對五五丹具有一定的適應(yīng)能力，可通過調(diào)節(jié)其相關(guān)代謝或增強(qiáng)其損傷修復(fù)功能從而使其毒性降低。
　　 5．NF-κB參與五五丹誘導(dǎo)的大鼠腎臟細(xì)胞凋亡，五五丹可通過調(diào)控NF-κB凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平引起腎臟細(xì)胞凋亡。毒性大，則NF-κB表達(dá)水平顯著性升高。用藥時(shí)間延長，對NF-κB蛋白表達(dá)的影響明顯減弱。
　　 6．推