黃丹蘭顆粒劑毒性、抗癌作用及制劑質(zhì)量控制研究.pdf

1、目的：通過(guò)黃丹蘭顆粒劑對(duì)小鼠的急性毒性和大鼠的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究，考察對(duì)試驗(yàn)動(dòng)物有無(wú)毒性；建立小鼠Hca-F肝癌模型，觀察黃丹蘭顆粒劑對(duì)Hca-F荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用；采用高效液相色譜法測(cè)定黃丹蘭顆粒劑中苦參堿和氧化苦參堿含量，以建立黃丹蘭顆粒劑的質(zhì)量控制方法。
　　方法：
　　1.小鼠急性毒性試驗(yàn)即將黃丹蘭顆粒劑配成混懸液，以每毫升相當(dāng)于0.4g顆粒劑的劑量通過(guò)灌注的方式送到小鼠胃中，持續(xù)一個(gè)星期的觀察，同時(shí)記錄小鼠體重的

2、波動(dòng)情況，評(píng)價(jià)試驗(yàn)小鼠的精神、食欲、膚色、分泌物、眼、呼吸、肌肉運(yùn)動(dòng)等方面變化。
　　2.大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)是將黃丹蘭顆粒劑溶于水中，配置成三種不同濃度：0.4 g/(kg·d)、1.04 g/(kg·d)、2.83 g/(kg·d)的混懸液，并依次標(biāo)明為低劑量、中劑量以及高劑量，并通過(guò)灌注的方式將其送到大鼠胃內(nèi)，按照1次/天的標(biāo)準(zhǔn)持續(xù)灌注一個(gè)月，在此期間檢查和統(tǒng)計(jì)大鼠的血液學(xué)指標(biāo)，比如凝血時(shí)間、紅細(xì)胞數(shù)量、白細(xì)胞數(shù)量、血小板數(shù)量、

3、血紅蛋白含量、白細(xì)胞分類等，除此之外還要觀察和統(tǒng)計(jì)尿常規(guī)、血液生化指標(biāo)、各臟器、睪丸或子宮的情況，采用病理學(xué)方法對(duì)這些組織進(jìn)行檢測(cè)。
　　3.該藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝癌Hca-F荷瘤小鼠模型的影響通過(guò)小鼠肝癌Hca-F小鼠細(xì)胞株注射造模，觀察黃丹蘭顆粒劑對(duì)肝癌 Hca-F荷瘤小鼠抑瘤率、對(duì)荷瘤小鼠免疫器官指數(shù)的影響以及 Hca-F荷瘤小鼠巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞實(shí)驗(yàn)作為觀察指標(biāo)，探討黃丹蘭顆粒劑對(duì) Hca-F荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用及機(jī)制；通過(guò)

4、對(duì)荷瘤小鼠血清中IL-2和VEGF表達(dá)水平的測(cè)定考察黃丹蘭顆粒劑對(duì)荷瘤小鼠免疫功能的影響以及黃丹蘭顆粒劑抗癌作用的有效性。
　　4.采用TIANHE? Kromasil C18柱（200 mm×4.6 mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液（pH=3.0）-甲醇（93:7），流速為0.8 ml·min-1，柱溫為35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm的HPLC法測(cè)定黃丹蘭顆粒劑中苦參堿和氧化苦參堿含量。
　　結(jié)果：
　　1

5、.小鼠急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)施藥物治療后，小鼠的普通行為、反射行為、對(duì)食物和水的需求、大小便等都沒有出現(xiàn)任何異常。
　　2.大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)結(jié)果表明，服用不同劑量的黃丹蘭顆粒劑后，大鼠體重上升幅度以及行為均保持正常，并且各項(xiàng)針對(duì)血液、尿液、器官組織的檢查結(jié)果也表明基本和對(duì)照組一致。組織病理學(xué)檢查結(jié)果表明，接受藥物治療的大鼠的臟器都沒有出現(xiàn)毒性病理改變。
　　3.黃丹蘭顆粒劑對(duì)小鼠Hca-F肝癌模型的影響的試驗(yàn)結(jié)果顯示，黃丹

6、蘭顆粒劑能抑制肝癌Hca-F荷瘤小鼠腫瘤的生長(zhǎng)，以高劑量更明顯；并且黃丹蘭顆粒劑在一定程度上能夠提高荷瘤小鼠的免疫功能。
　　4.苦參堿進(jìn)樣濃度在2.5μg/ml~25.0μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率為99.99％，RSD=0.0577%(n=6)；氧化苦參堿進(jìn)樣濃度在2.0μg/ml~20.0μg/ml范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，加樣回收率的平均值為99.78%，RSD=0.4432%(n=6)。
　　結(jié)論：