犬同種異體分期喉移植模式的初步研究及移植物免疫排斥相關(guān)因素分析.pdf

1、目的：喉含有血管、神經(jīng)、軟骨、腺體等多種組織成分，其移植后面臨著更為復(fù)雜的免疫排斥；免疫抑制劑的長(zhǎng)期使用有無誘發(fā)頸部癌腫復(fù)發(fā)的可能，仍無明確的答案。諸多因素制約了喉移植研究的進(jìn)展。喉移植術(shù)后移植喉并非處于無菌環(huán)境中，容易受到咽部及氣管兩處來源的感染，移植后大劑量免疫抑制劑的使用又降低了宿主的抗感染能力；同時(shí)喉與皮膚及咽部間組織較少，使感染機(jī)率增加，較肺、心、腎等移植感染不易控制，所以控制感染是保證喉移植存活的關(guān)鍵；另外同種異體喉植入受體

2、后，如何早期鑒別移植物是否成活是困擾喉移植研究的難題。本實(shí)驗(yàn)通過動(dòng)物頸部解剖觀察選定合適的喉移植動(dòng)物模型，建立分期喉移植模式，并進(jìn)行移植喉體的組織學(xué)觀察和免疫因子檢測(cè)，試圖摸索成功的喉移植模型并尋找該模型可靠的免疫排斥檢測(cè)指標(biāo)。 方法：1.對(duì)6只比格犬、6只Wista大鼠、4只家貓分別進(jìn)行頸部解剖，觀察測(cè)量喉部供應(yīng)血管，選擇最適合喉移植的動(dòng)物模型。2.選定比格犬為喉移植動(dòng)物模型，選擇體重10～15kg的比格犬兩兩配對(duì)進(jìn)行喉移植，

3、先將供體喉與受體犬頸部血管重建血運(yùn)后埋藏于受體犬頸部組織中，不與咽氣管腔相通，使感染源最少，建立Ⅰ期喉移植模型；將比格犬分組為同種異體喉移植加環(huán)孢素組(A組，11只)，同種異體喉移植不加環(huán)孢素組(B組，6只)，自體喉再造組(C組，4只)，定期取供喉標(biāo)本進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)粘膜、血管內(nèi)皮、神經(jīng)、軟骨的變化。3.定期采集受體犬靜脈血，進(jìn)行IL2、TNFa免疫因子的檢測(cè)。4.定期進(jìn)行T細(xì)胞分型CD4+T、CD8+T檢測(cè)，計(jì)算CD4/CD8比值。

4、 結(jié)果：1.比格犬喉部血液供應(yīng)來自頸總動(dòng)脈發(fā)出的分支-顱甲動(dòng)脈和喉動(dòng)脈，單側(cè)顱甲動(dòng)脈可以滿足喉體血流的需要；喉部靜脈回流至舌骨靜脈弓，再回流至頸外靜脈；吻合帶有顱甲動(dòng)脈的頸總動(dòng)脈和舌骨靜脈弓的頸外靜脈，可以保證移植喉體的血流供應(yīng)。2.喉移植后的主要組織學(xué)變化是粘膜上皮的改變。A組在移植后的組織學(xué)改變?yōu)檩p中度免疫排斥，在3～5天時(shí)出現(xiàn)，粘膜上皮細(xì)胞以區(qū)域性脫失、形成小潰瘍?yōu)橹?，早期神?jīng)、軟骨無明顯異常，2周以上的變化不明顯；B組表現(xiàn)為

5、中重度免疫排斥反應(yīng)移植后粘膜上皮細(xì)胞逐漸壞死、上皮脫失，固有膜腺體萎陷、壞死，神經(jīng)脫髓鞘，軟骨核固縮、碎裂，2周以上喉體外形喪失，組織溶解；C組無免疫排斥出現(xiàn)。電鏡下超微結(jié)構(gòu)改變以粘膜空泡變性為主，線粒體空泡變性明顯，并明顯早于光鏡下改變。3.移植后IL2、TNFa免疫因子三組中均升高，A、C組IL2、TNFa分別在移植后第一天、第三天達(dá)峰值，隨后逐漸降低，B組移植后一直升高；IL2較TNFa改變出現(xiàn)早。T細(xì)胞分型中CD4+T和CD8+

6、T移植后變化不一，CD4+T呈升高、CD8+T呈下降趨勢(shì)，CD4/CD8比值在A組中先升高后降低，約至10天時(shí)恢復(fù)到移植前水平，B組中CD4/CD8比值隨時(shí)間而增加，C移植前后變化不明顯。 結(jié)論：1.比格犬是適合進(jìn)行喉移植的動(dòng)物模型；分期喉移植模式切實(shí)可行；移植后的3～5天是危險(xiǎn)期，移植后的免疫抑制劑劑量應(yīng)根據(jù)體重隨時(shí)調(diào)整；Ⅰ期移植后7～10天可以進(jìn)行Ⅱ期喉再造。2.使用免疫抑制劑可以有效改善宿主抗移植物免疫排斥反應(yīng)。3.IL2