麗江云杉體胚發(fā)生及特異蛋白的研究.pdf

1、細胞全能性是指植物細胞具有全套遺傳信息，不論是性細胞還是體細胞，在特定環(huán)境下能進行表達，而產(chǎn)生一個獨立完整的個體。體胚發(fā)生是植物細胞全能性的一種表達方式。作為20世紀后期植物組織培養(yǎng)技術中的一個重大突破，體胚發(fā)生技術無論在理論研究還是實際應用方面都具有非常重要的意義。
　　 針葉樹種在世界范圍內分布很廣，在整個林木類群中占有非常重要的地位，但由于樹種的特性，它們的體細胞胚胎發(fā)生被認為是難度最大的，但其中云杉屬樹種的體胚發(fā)生相對容

2、易，而成為針葉樹種體胚發(fā)生研究的模式樹種。
　　 本論文以云南有分布的唯一云杉屬樹種麗江云杉(Picea Likiangensis)成熟胚為外植體，分別從不同基本培養(yǎng)基、不同外源激素組合、不同基因型等方面探討了其胚性愈傷誘導的情況，獲得其胚性愈傷誘導、增殖、體胚成熟和萌發(fā)等階段的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，同時測定并分析了麗江云杉體胚發(fā)育各階段材料的可溶性蛋白含量及特異蛋白組分，研究為進一步開展其它針葉樹種的體胚發(fā)生技術及探索體胚發(fā)生分子

3、機理奠定基礎。研究結果如下：
　　 1、獲得了7個不同單株共331個麗江云杉體細胞胚胎發(fā)生的胚性愈傷組織，為麗江云杉體胚快繁，針葉樹種體胚發(fā)生機理和遺傳轉化研究提供充分材料。
　　 2、建立了麗江云杉體胚發(fā)生體系。(1)胚性愈傷誘導培養(yǎng)基：1/2LM+2，4-D3mg.L.1+BA1.5mg-L-1；(2)胚性愈傷增殖擴繁保持培養(yǎng)基：與誘導培養(yǎng)基相同；(3)體胚成熟培養(yǎng)基：1/2LM+ABA(60mg/l)+PEG(7.

4、5％)；(4)體胚萌發(fā)培養(yǎng)基：DCR+AC(0.2％)。暗中，室溫或21-23℃中培養(yǎng)。
　　 3、胚性愈傷組織的誘導研究表明：不同基本培養(yǎng)基、激素組合、基因型其胚性愈傷組織誘導的結果截然不同。誘導胚性愈傷組織的較適培養(yǎng)基為1/2LM+2，4-D3mg·L-1+BA1.5mg·L-1，誘導率可達15.37％。
　　 4、采用考馬斯亮藍G-250法測定了非胚性愈傷組織、胚性愈傷組織和體胚4個發(fā)育階段(球形胚、心形胚、魚雷胚

5、及子葉胚)的總蛋白質相對含量，分析并獲得其可溶性蛋白含量的動態(tài)變化特征。
　　 5、采用SDS-PAGE凝膠電泳對上述材料進行了特異蛋白組分的分析，結果發(fā)現(xiàn)：非胚性愈傷組織有94KD、64KD、31KD特異蛋白的表達；胚性愈傷組織的特異蛋白包括96KD、63KD、58KD、35KD蛋白；體胚發(fā)育特異蛋白有60KD、58KD、45KD蛋白。研究結果將有助于進一步探索針葉樹種體胚再生基因調控的分子機理，以及外界因子對其調控機制，為針