膠原三股螺旋重疊蛋白1基因在喉癌組中表達及其意義.pdf

1、目的:
　　喉癌作為耳鼻咽喉-頭頸外科常見的惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率有逐年上升趨勢。喉癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移是一個多因素、多階段和多基因參與的過程，由多種癌基因的激活、抑癌基因的失活及凋亡基因的失控相互作用引起的。本實驗通過檢測膠原三股螺旋重疊蛋白1(CTHRC1)在喉癌組織中的表達水平，分析CTHRC1的表達與各臨床病理因素之間的關(guān)系及臨床意義，初步研究其在喉癌發(fā)生發(fā)展中的意義，為喉癌的早期診斷及基因治療提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。

2、
　　方法:
　　實驗對象:材料來源于天津醫(yī)科大學第二醫(yī)院2008年2月至2013年10月耳鼻咽喉-頭頸外科的住院的喉癌手術(shù)患者，選取喉鱗癌標本62例，均經(jīng)病理證實為鱗狀細胞癌，臨床分期采用國際抗癌協(xié)會(UICC)2002年公布的TNM分類分期標準Ⅰ、Ⅱ期42例，Ⅲ期20例，聲門上型33例，聲門型29例。年齡42～75歲，中位年齡59歲。對聲門型Ⅰ、Ⅱ期喉癌行喉部分切除術(shù)，Ⅲ期行次全切除喉或全切術(shù)，聲門上型Ⅰ、Ⅱ期行水平半喉

3、切除，Ⅲ期行喉次全切除或喉全切除術(shù)，其中15例獲得相應聲門上型癌旁喉正常粘膜作為對照（取距癌緣5mm處），經(jīng)病理證實為炎癥或正常粘膜，其中男性56例，女性6例，高分化38例，中分化14例，低分化10例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有13例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的有49例;上述組織為喉鱗癌石蠟標本。
　　為了驗證免疫組化的結(jié)果，我們收集20例聲門上型和聲門型喉鱗癌組織與癌旁5mm以上的正常上皮組織（經(jīng)病理證實無瘤組織浸潤）的冰凍(-80)標本提取mRNA

4、。其中男18例，女2例，高-中分化17例，低分化3例，Ⅰ、Ⅱ期12例，Ⅲ期8例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例，全部患者術(shù)前均未接受放射治療和化學治療，臨床資料完整，通過倫理委員會審查。
　　1應用免疫組織化學(immunohistochemistry， IHC) S-P二步法檢測62例喉鱗癌組織，15例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1基因的蛋白表達情況，并檢測CTHRC1是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時存在表達差異，并統(tǒng)計分析它們與臨床病理因

5、素的相關(guān)性。
　　2應用逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(RT-PCR)方法檢測20例喉鱗癌冰凍(-80℃)組織及20例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1的mRNA表達情況，并統(tǒng)計分析驗證它們與臨床病理因素的相關(guān)性。
　　3統(tǒng)計學處理:應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，采用Pearson's Chi-Square檢驗分析CTHRC1 mRNA及蛋白的表達與喉鱗癌患者臨床病理因素的關(guān)系;RT-PCR結(jié)果采用Independent-

6、Samples T檢驗分析。以P＜0.05為差異在統(tǒng)計學上有意義，以P＜0.01為差異在統(tǒng)計學上有非常顯著意義。
　　結(jié)果:
　　1 CTHRC1 mRNA及蛋白在喉鱗癌組織和癌旁喉正常粘膜中的表達及其與臨床病理因素之間的關(guān)系。
　　1.1免疫組化法:應用S-P二步法檢測(1)62例喉鱗癌組織和15例癌旁喉正常粘膜中CTHRC1的蛋白表達情況，細胞漿中陽性表達率分別為79.03％(49/62)和13.33％(2/15)

7、，前者明顯高于后者，二者統(tǒng)計學上差異具有非常顯著性意義（P＜0.01），CTHRC1在喉鱗癌組織中的蛋白表達明顯高于癌旁喉正常粘膜組織。(2) CTHRC1在喉鱗狀細胞癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達:CTHRC1在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的喉癌組織中陽性表達率為92％(23/25)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的喉癌組織中陽性表達率為70.27％(26/37)，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽性表達率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，二者差異在統(tǒng)計學上具有意義(P＜0.05）。在喉鱗

8、癌中CTHRC1的蛋白表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)（P＜0.05），而與臨床分型、性別及年齡分組無關(guān)（P＞0.05）。
　　1.2 RT-PCR法:應用RT-PCR法檢測20例喉鱗癌組織和20例癌旁喉正常粘膜組織中CTHRC1 mRNA的表達情況，喉鱗癌組織的mRNA的平均灰度值為0.93±0.15，而配對正常喉組織中CTHRC1的mRNA的平均灰度值為0.29±0.23， CTHRC1在喉鱗癌組織中的mRNA表達明顯高于癌旁喉

9、正常粘膜組織，二者統(tǒng)計學上差異具有非常顯著性意義(P＜0.01)（圖一、二）;在喉鱗癌中CTHRC1 mRNA的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.05）、臨床分期(P＜0.01)相關(guān)，而與臨床分型、性別及年齡分組無關(guān)(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1在喉鱗癌組織中，CTHRC1呈高表達，提示其可能與喉鱗癌的發(fā)生進展相關(guān)。
　　2在喉鱗癌組織中，CTHRC1呈高表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期相關(guān)而與腫瘤病理學分級、性別及年齡分組