轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制炎性骨吸收的研究.pdf

1、本文從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 轉(zhuǎn)化生長因子β1通過誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞新生抑制組織工程軟骨吸收
　　目的:探討轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-betal，TGF-β1)抑制細(xì)胞凋亡和組織工程軟骨吸收的機(jī)制。
　　方法:我們將TGF-β1基因轉(zhuǎn)染至骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后與CD4+T細(xì)胞，促炎因子干擾素(IFN)-γ和腫瘤壞死因子(TNF)-α共培養(yǎng)，分析骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)

2、學(xué)改變，凋亡，軟骨分化能力以及CD4+T細(xì)胞的表型變化。
　　結(jié)果:加入IFN-γ和TNF-α的培養(yǎng)組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡和組織工程軟骨吸收明顯多于對(duì)照組。與此相反，加入CD4+T細(xì)胞的培養(yǎng)組骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡和組織工程軟骨吸收較少，在該組中我們發(fā)現(xiàn)了Foxp3+T細(xì)胞和CD25+CD39+T細(xì)胞。此外，在未轉(zhuǎn)染TGF-β1基因的培養(yǎng)組中，檢測不到Ⅱ型膠原、Foxp3+T細(xì)胞或CD25+CD39+T細(xì)胞。
　　結(jié)論: IF

3、N-γ和TNF-α誘導(dǎo)了骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡和組織工程軟骨吸收，但新生的調(diào)節(jié)性T(Treg)細(xì)胞能夠抑制IFN-γ和TNF-α的功能進(jìn)而保護(hù)種子細(xì)胞和組織工程軟骨。TGF-β1不僅發(fā)揮了軟骨誘導(dǎo)作用，同時(shí)促使CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Treg細(xì)胞。
　　第二部分 轉(zhuǎn)化生長因子β1誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制內(nèi)源性IFN-γ和TNF-α導(dǎo)致的組織工程軟骨吸收
　　目的:探討CD4+T細(xì)胞是否能夠分泌內(nèi)源性IFN-γ和TNF-α，以及它們的

4、功能，并進(jìn)一步研究誘導(dǎo)的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(induced Treg cells，iTreg)對(duì)于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和組織工程軟骨的保護(hù)作用。另外，我們還將探討在這一共培養(yǎng)體系中TGF-β1的功能。
　　方法:將轉(zhuǎn)染(或未轉(zhuǎn)染)TGF-β1基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（TGF-β1+/-BMMSCs）與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)。用PCR、流式細(xì)胞術(shù)和蛋白質(zhì)印跡法等評(píng)估Treg細(xì)胞標(biāo)記物（Foxp3、CD25和CD39）、促炎因子IFN-γ和TNF-

5、α的表達(dá)水平，評(píng)價(jià)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡以及組織工程軟骨吸收情況。
　　結(jié)果:TGF-β1+/-BMMSCs+CD4+T細(xì)胞的共培養(yǎng)體系中均有IFN-γ和TNF-α基因和蛋白表達(dá)。TGF-β1+BMMSCs+CD4+T細(xì)胞的共培養(yǎng)體系中Foxp3基因高表達(dá)以及17.58±0.45％細(xì)胞為CD25+CD39+細(xì)胞，且骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡率較TGF-β1-BMMSCs+CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)體系中少(p＜0.01)，Ⅱ型膠原的表達(dá)量較單純

6、TGF-β1+BMMSCs培養(yǎng)組少(p＜0.05)，且染色較淺。
　　結(jié)論:CD4+T細(xì)胞可以通過分泌內(nèi)源性的IFN-γ和TNF-α，導(dǎo)致骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡和組織工程軟骨吸收。同時(shí)，TGF-β1能夠誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞分化為iTreg細(xì)胞，抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡和組織工程軟骨吸收。
　　第三部分 TGF-β1通過調(diào)節(jié)局部免疫反應(yīng)促進(jìn)Bio-Oss成骨的應(yīng)用
　　目的:探討抑制Bio-Oss周圍炎癥，促進(jìn)Bio-Oss

7、在體內(nèi)成骨的方法，以期為提高臨床牙種植的成功率提供參考依據(jù)。
　　方法:首先將骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)于帶有Bio-Oss的培養(yǎng)液中，通過檢測細(xì)胞與材料的分布關(guān)系以及材料對(duì)細(xì)胞增殖分化的影響了解Bio-Oss與細(xì)胞的生物相容性;其次建立兔牙槽骨缺損模型并分組修復(fù)，通過改變Bio-Oss在體的微環(huán)境，觀察Bio-Oss在體內(nèi)的成骨效果。
　　結(jié)果:共培養(yǎng)組細(xì)胞沿胞體長軸呈有序排列，較均勻地貼附于材料表面，與單純細(xì)胞組相比未見明顯差

8、異，Bio-Oss對(duì)TGF-β1+BMMSCs的增殖及堿性磷酸酶(ALP)活性未見明顯影響。牙槽骨缺損修復(fù)術(shù)后30、60、90天時(shí)，Bio-Oss逐漸由散在顆粒狀與周圍骨組織融合、成骨，但是在促炎因子IFN-γ和TNF-α參與時(shí)，Bio-Oss成骨明顯滯后。TGF-β1+BMMSCs參與修復(fù)組較單純Bio-Oss修復(fù)組成骨作用不顯著。
　　結(jié)論:TGF-β1+BMMSCs與Bio-Oss有良好的生物相容性。TGF-β1+BMMSC