溶澡弧菌PCR檢測及SSCP在毒力株鑒定的應用.pdf

1、本研究選擇gyrB基因為靶基因，以溶藻弧菌種特異性區(qū)域設計特異性引物，該引物能將典型溶藻弧菌與其它弧菌或非弧菌細菌區(qū)分開來。為了進一步驗證該檢測技術(shù)的準確性，進行為期一年的實樣檢測。該PCR從874株細菌里檢測出77株陽性菌，經(jīng)過SSCP分析，該77株陽性菌分屬于4個分子型，通過對不同分子型的陽性菌株進行抽樣測序，結(jié)果表明抽選的所有陽性菌株的gyrB基因片段序列與溶藻弧菌的同源性最高，由此認為均為溶藻弧菌，所以該PCR檢測技術(shù)準確率為1

2、00％。基于gyrB基因片段的SSCP分型，可將77株溶藻弧菌分為4個分子型：a、b、c和d型，而基于膠原蛋白酶基因片段的分型，可將77株溶藻弧菌分為13個分子型：A1、A2、A3、A4、B、C、D、E、F、G1、G2、H和I型，分辨率得到很大提高。其中A1型是優(yōu)勢分子型，占總數(shù)的48.1％。從南油分離的菌株的多態(tài)性明顯高于特呈和麻斜，25個菌株包含了11個分子型，其中A3、A4、E、G1和G2型，是南油所獨有的，A2型也主要分布于南油

3、。從麻斜分離的菌株的多念性也較為豐富，29個菌株可分出7個分子型，其中H和I型是麻斜獨有的。從特呈分離的菌株的多態(tài)性最低，23個菌株只包含4個分子型。除了D型主要分布于特呈外，其它三個分子型都普遍存在于三個養(yǎng)殖區(qū)。根據(jù)gyrB和膠原蛋白酶-SSCP型的組合將細菌分組，每個組合代表一種基因遺傳型，可分為15個遺傳型，然后每組隨機挑選若干菌株進行致病性實驗。發(fā)現(xiàn)溶藻弧菌的毒力與膠原蛋白酶-SSCP分型呈相關(guān)關(guān)系(r=0.438 p<0.01