百脈根LjPP2C蛋白磷酸酶負(fù)調(diào)控MPK6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑.pdf

1、根瘤菌和豆科植物之間形成的根瘤共生固氮系統(tǒng)是自然界中植物獲取氮素最環(huán)保、經(jīng)濟(jì)的方式，對(duì)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展有重要意義。根瘤共生固氮系統(tǒng)的建立需要一系列的信號(hào)途徑。共生信號(hào)途徑中的受體激酶SymRK和有絲分裂原激活蛋白激酶激酶SIP2特異性的相互作用。SIP2屬于MAPK信號(hào)途徑中的MAPKK家族，調(diào)節(jié)早期侵入線和根瘤原基的形成，是一個(gè)重要的早期共生信號(hào)調(diào)節(jié)子。本研究是以SIP2的靶蛋白MPK6為研究對(duì)象，通過(guò)篩選百脈根的AD-cDNA文庫(kù)，

2、分離鑒定出與MPK6相互作用的蛋白，主要研究結(jié)果如下:
　　1.從百脈根cDNA中擴(kuò)增出MPK6全長(zhǎng)基因，利用酵母菌株Y187中的報(bào)告基因LacZ，檢測(cè)MPK6的轉(zhuǎn)錄激活作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)MPK6在酵母系統(tǒng)里有自激活活性，不能作為誘餌蛋白。通過(guò)分析MPK6的蛋白序列，構(gòu)建7個(gè)缺失突變載體，并分別檢測(cè)他們的轉(zhuǎn)錄激活活性和β-半乳糖甘酶活性。結(jié)果表明MPK6的轉(zhuǎn)錄激活位點(diǎn)位于362-386個(gè)氨基酸之間。
　　2.以含有MPK6完整激

3、酶結(jié)構(gòu)域且沒(méi)有轉(zhuǎn)錄激活作用的MPK61-351為誘餌篩選百脈根AD-cDNA酵母雙雜交文庫(kù)，分離鑒定出一個(gè)編碼2C類蛋白磷酸酶的基因，命名為L(zhǎng)jPP2C。生物信息學(xué)分析顯示LjPP2C屬于PP2C大家族，通過(guò)蛋白序列和進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)LjPP2C屬于B類亞家族。
　　3.通過(guò)酵母雙雜交、體外蛋白Pull-down以及雙分子熒光互補(bǔ)(BiFC)實(shí)驗(yàn)證明MPK6全長(zhǎng)和LjPP2C有相互作用。
　　4.在體外，LjPP2C能夠使磷酸