高遷移率族蛋白B1在蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣炎癥反應(yīng)中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：1、探討腫瘤壞死因子(TNF-α)與蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后腦血管痙攣(CVS)的關(guān)系。2、探討SAH后高遷移率族蛋白(HMGB1)HMGB-1誘生機(jī)制。3、探討HMGB1致血管痙攣?zhàn)饔玫男盘?hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。 方法： 實(shí)驗(yàn)1、蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣及炎癥反應(yīng)。枕大池二次注血方法制作SAH模型，觀察基底動(dòng)脈的血管形態(tài)學(xué)變化；采用免疫組化、ELISA和RT-PCR方法檢測TNF-α在SAH后基底動(dòng)脈中的表達(dá)變化。

2、 實(shí)驗(yàn)2、蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦血管痙攣時(shí)HMGB1的表達(dá)變化及其表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究。制作SAH模型，ELISA及RT-PCR方法觀察HMGB1在SAH后基底動(dòng)脈中的表達(dá)變化；以免疫組化方法檢測基底動(dòng)脈p-p38MAPK的表達(dá)情況，RT-PCR方法檢測p38MAPK的表達(dá)。制作SAH模型，注血前30分鐘預(yù)先給與SB203580，ELISA及RT-PCR檢測，觀察HMGB1在SB203580治療后基底動(dòng)脈中的表達(dá)變化。 實(shí)驗(yàn)3、HM

3、GB1致腦血管痙攣?zhàn)饔眉捌渥饔玫男盘?hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究。枕大池注入三種劑量HMGB1(三種劑量：10 ng/只、100ng/只、1000 ng/只)，H．E染色觀察基底動(dòng)脈的血管形態(tài)學(xué)變化；選擇最合適HMGB1劑量制作HMGB1模型，以免疫組化、ELISA、RT-PCR方法檢測基底動(dòng)脈中TNF-α的表達(dá)情況；以免疫組化方法檢測基底動(dòng)脈p-p38MAPK的表達(dá)情況，Western-blot和RT-PCR方法，觀察基底動(dòng)脈中p38MAPK表達(dá)變化

4、情況；制作HMGB1模型，注藥前30分鐘預(yù)先給與SB203580，觀察基底動(dòng)脈的血管形態(tài)學(xué)變化，以免疫組化、ELISA和RT-PCR方法，檢測TNF-α在注藥后基底動(dòng)脈中的表達(dá)變化情況。 結(jié)果： 實(shí)驗(yàn)1、SAH后大鼠基底動(dòng)脈出現(xiàn)痙攣，5-7天時(shí)最明顯。同時(shí)基底動(dòng)脈中TNF-α陽性內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)、TNF-α蛋白及mRNA水平增高，7天時(shí)達(dá)高峰。 實(shí)驗(yàn)2、基底動(dòng)脈HMGB1蛋白及mRNA水平在SAH后升高，并于7天達(dá)高峰

5、。SAH后基底動(dòng)脈p-p38MAPK蛋白、p38MAPK基因表達(dá)增加，5天時(shí)達(dá)高峰。SB203580治療后大鼠基底動(dòng)脈HMGB1蛋白、mRNA升高，5-7天達(dá)高峰。與未治療組相比，治療組基底動(dòng)脈HMGB1蛋白、基因濃度每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均降低。 實(shí)驗(yàn)3、枕大池內(nèi)注入HMGB1(100ng/只)最適宜，基底動(dòng)脈出現(xiàn)痙攣，5天最為明顯?；讋?dòng)脈TNF-α陽性的內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)、蛋白、mRNA表達(dá)增加，于5天時(shí)達(dá)高峰?；讋?dòng)脈p-p38MAPK蛋白

6、及p38MAPK基因表達(dá)從1天時(shí)開始升高，5-7天達(dá)高峰。SB203580治療后基底動(dòng)脈出現(xiàn)痙攣，但與同時(shí)相的未治療組相比，基底動(dòng)脈痙攣緩解。SB203580治療組基底動(dòng)脈TNF-α蛋白、mRNA水平增高并于3天時(shí)達(dá)高峰。與未治療相比，抑制p38MAPK途徑后各時(shí)間點(diǎn)TNF-α表達(dá)均減少。 結(jié)論： 1、SAH后基底動(dòng)脈出現(xiàn)痙攣狀態(tài)，TNF-α可能導(dǎo)致SAH后CVS。 2、SAH后可能通過p38MAPK信號(hào)通路的激