P物質(zhì)和一氧化氮在變應(yīng)性接觸性皮炎小鼠瘙癢發(fā)生機(jī)制中的作用.pdf

1、目的: 1.建立2，4-二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)的變應(yīng)性接觸性皮炎(ACD)小鼠模型，觀察小鼠的搔抓反應(yīng)。 2.觀察spantide(NK1受體拮抗劑)、L-精氨酸、一氧化氮合酶(NOS)抑制劑預(yù)處理對(duì)ACD小鼠搔抓行為的影響，探討P物質(zhì)(SP)和一氧化氮(NO)在ACD小鼠模型瘙癢發(fā)生中的作用。 方法: 1.ACD小鼠模型的建立選用健康雄性BALB/c小鼠。模型組在第1、2天于腹部剃毛區(qū)外涂0.5％D

2、NFB 25μL致敏，第6天于頸背部剃毛區(qū)外涂0.2％DNFB 20μL激發(fā)。對(duì)照I組外涂溶劑致敏和激發(fā)，對(duì)照Ⅱ組外涂0.5％DNFB致敏和溶劑激發(fā)，對(duì)照Ⅲ組外涂溶劑致敏和0.2％DNFB激發(fā)，致敏、激發(fā)劑量和用藥時(shí)間均與模型組一致。 2.ACD小鼠搔抓行為的觀察在無人、安靜的環(huán)境中，于激發(fā)后0～1h、6～7h，12～13h，24～25h、36～37h、48～49h，60～61h，72～73h，84～85h，96～97h，用攝像

3、機(jī)持續(xù)拍攝小鼠活動(dòng)1h。錄像回放，由不知情人員計(jì)算小鼠搔抓次數(shù)。 3.spantide、L-精氨酸、NOS抑制劑對(duì)ACD小鼠搔抓行為的影響(1)激發(fā)前0.5h和激發(fā)后11.5h、35.5h、59.5h、83.5h皮內(nèi)注射生理鹽水(0.05 mid、spantide(0.5nmol，0.05mL)、L-精氨酸(300nmol，0.05mid、L-NAME(NOS抑制劑；100nmol，0.05 mid、7-硝基吲唑(NOS1抑制劑

4、；10nmol，0.05mL)或氨基胍(NOS2抑制劑；50nmol，0.05mid，分別觀察小鼠搔抓次數(shù)的變化。 (2)激發(fā)前10min和激發(fā)后35h 50min、83h 50min皮內(nèi)注射相同劑量的生理鹽水、spantide、L-精氨酸、L-NAME、7-硝基吲唑或氨基胍，分別觀察小鼠搔抓次數(shù)的變化。 4.皮損內(nèi)總NO含量的檢測在激發(fā)后0～1h、36～37h處死小鼠，剪下頸背部皮損進(jìn)行組織勻漿，應(yīng)用硝酸還原酶法檢測勻

5、漿上清液中NO含量。 結(jié)論: 1.ACD小鼠在激發(fā)后0～1h出現(xiàn)搔抓高峰，隨后搔抓次數(shù)迅速減少，搔抓時(shí)程與遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)過程相似。 2.spantide預(yù)處理對(duì)ACD小鼠搔抓行為無明顯影響，提示SP可能不是DNFB誘導(dǎo)的BALB/c小鼠ACD模型的主要瘙癢介質(zhì)。 3.L-精氨酸和NOS抑制劑預(yù)處理基本上不影響ACD小鼠搔抓行為，皮損內(nèi)NO含量不隨ACD小鼠搔抓時(shí)程的變化而變化，提示NO在DNFB誘導(dǎo)的BA