P物質(zhì)對(duì)HaCaT細(xì)胞一氧化氮合成的影響及其作用機(jī)制研究.pdf

1、[目的]
　　 觀察P物質(zhì)(SP)、NK1受體拮抗劑和一氧化氮合酶(NOS)抑制劑對(duì)體外培養(yǎng)的人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT細(xì)胞一氧化氮(NO)分泌和誘導(dǎo)型NOS(iNOS)表達(dá)的影響,探討SP對(duì)HaCaT細(xì)胞一氧化氮合成的作用機(jī)制。
　　 [方法]
　　 1.人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)至五代后,觀察不同濃度SP(10-9～10-6mol/L)處理后30 min、1h、3 h、6 h、12 h、2

2、4 h,用硝酸還原酶法測(cè)定上清液中NO含量。
　　 2.HaCaT細(xì)胞中分別加入10-8mol/L SP、10-8mol/L SP+3×10-7mol/Lspantide,30 min、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h后測(cè)定NO水平。
　　 3.HaCaT細(xì)胞中分別加入10-8 mol/L SP、10-8mol/L SP+10-7mol/L氨基胍、10-8mol/L SP+10-6mol/L7-硝基吲唑、10-

3、8mol/L SP+10-5mol/L L-NAME,30min、1 h、24 h后測(cè)定NO水平。
　　 4.HaCaT細(xì)胞中加入10-8mol/LSP,1h、24h、48 h后用RT-PCR檢測(cè)iNOSmRNA表達(dá)。
　　 [結(jié)果]
　　 1.SP組HaCaT細(xì)胞NO水平明顯高于對(duì)照組(P＜0.0001),其中10-8mol/L SP刺激HaCaT細(xì)胞分泌的NO量最高;各組在不同時(shí)間點(diǎn)上差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

4、0.0001),以SP處理后1 h的NO分泌量最高。
　　 2.spantide組HaCaT細(xì)胞NO水平明顯低于SP組(P＜0.0001),二者在不同時(shí)間點(diǎn)上差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.0001)。
　　 3.L-NAME組HaCaT細(xì)胞NO水平在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)上均明顯低于SP組(P＜0.05),7-硝基吲唑組與SP組在30 min、1h差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),而氨基胍組與SP組在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上差別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

5、＞0.05)。
　　 4.SP處理后24 h、48 h可見HaCaT細(xì)胞表達(dá)iNOS mRNA,其中以48 h較為明顯(P＜0.0001)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.10-9～10-6mol/L SP可誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞分泌NO,其中以10-8mol/L SP效應(yīng)最明顯。
　　 2.Spantide對(duì)SP誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞分泌NO起抑制作用,提示SP通過激活細(xì)胞內(nèi)的NK1受體誘導(dǎo)細(xì)胞分泌NO。