RAGE和脂質(zhì)過氧化損傷與糖尿病心肌病發(fā)病關(guān)系的研究.pdf

1、目的：糖尿病(DM)是一組由遺傳和環(huán)境因素相互作用所致的臨床綜合征。隨著糖尿病發(fā)病率的增高及病程的發(fā)展，糖尿病心血管并發(fā)癥發(fā)生率越來越高，糖尿病心血管病系統(tǒng)并發(fā)癥包括糖尿病心肌病(DCM)和糖尿病大血管病變。DCM是糖尿病心臟病的特異性改變，是一種獨立的糖尿病并發(fā)癥，高糖環(huán)境下產(chǎn)生的糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)及其受體(RAGE)已成為近年研究熱點，高糖環(huán)境下位于細胞膜上的RAGE被AGEs明顯上調(diào)，誘導(dǎo)多種氧自由基和一系列細胞因子的產(chǎn)生

2、，引起血管內(nèi)皮損傷、血流動力學(xué)和血液流變學(xué)異常、細胞基質(zhì)異常增生以及新生血管形成等一系列病理改變，從而促進糖尿病心肌病變的發(fā)生。脂質(zhì)過氧化損傷也與糖尿病心肌病變有著密切的聯(lián)系，體內(nèi)或組織中活性氧簇(ROS)產(chǎn)生過多和抗氧化能力的下降導(dǎo)致了組織脂質(zhì)過氧化損傷的出現(xiàn)，體內(nèi)活性氧增多可激活對氧自由基敏感的轉(zhuǎn)錄因子如NF-KappaB，參與炎癥過程及細胞增殖和粘附的蛋白基因轉(zhuǎn)錄，引起心肌血管及細胞損傷。本實驗采用單次腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)

3、誘發(fā)糖尿病大鼠模型，用RT-PCR方法半定量測定大鼠心肌RAGEmRNA的表達，用生物化學(xué)方法測抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)的表達量，旨在闡明糖尿病大鼠心肌RAGE及氧化應(yīng)激與糖尿病大鼠心肌病變的關(guān)系，為糖尿病心肌病變的發(fā)生機制提供新的科研證據(jù)，為其防治提供新的啟示和依據(jù)。 方法： 1.研究對象：SD雄性大鼠，50只，體重180-200g，隨機分為正常對

4、照組(N組20只)和實驗組(D組30只)，正常對照組再分為4周對照組(N4)和8周對照組(N8)，實驗組分為4周糖尿病組(D4)及8周糖尿病組(D8)，給予實驗組佐菌鏈脲素(STZ：枸櫞酸緩沖液溶解，PH4.5)60mg/kg單次腹腔注射誘發(fā)糖尿病模型，N組腹腔注射等量上述的枸櫞酸緩沖液。72h后測血糖及每周檢測血糖均≥16.7mmol/l，為糖尿病模型復(fù)制成功。其中D組2只血糖未達到標(biāo)準，4只大鼠在飼養(yǎng)過程中因感染、酮癥等原因死亡被剔

5、除。 2.研究方法 (1)成模后分別于4周及8周測大鼠體重、血糖、糖化血紅蛋白，麻醉后，取大鼠心臟，用冰生理鹽水充分沖洗后稱重，取約0.5×0.5cm左心室心肌置于4％福爾馬林中固定用于形態(tài)學(xué)觀察，取左室心肌100mg，置-80℃冰箱存放，取心肌組織200mg，于-20℃保存，用于備做RT-PCR及生化實驗。 (2)采用常規(guī)蘇木素伊紅HE染色方法光鏡下觀察心肌形態(tài)變化。 (3)用生物化學(xué)方法測心肌組織勻漿

6、中SOD、GSH-PX及MDA的含量。 (4)用RT-PCR方法檢測大鼠心肌中RAGE mRNA基因表達。 結(jié)果： 1.與正常組比較，D組血糖顯著升高，糖化血紅蛋白明顯升高，心臟相對重量增加。 2.與相應(yīng)周數(shù)大鼠相比，D4組大鼠心臟光鏡下無明顯病理學(xué)改變，D8組大鼠心肌組織出現(xiàn)心肌細胞腫脹、核仁固縮、小動脈壁細胞層數(shù)增多、核深染、部分小動脈玻璃樣變。 3.與相應(yīng)對照組相比較，D4、D8組大鼠心肌中

7、GSH-Px活性顯著下降，SOD酶活性顯著下降，MDA含量明顯增加。D8組與D4組大鼠相比較GSH-Px活性下降，SOD酶活性顯著下降，MDA含量明顯增加。 4.對N組及D組的RAGE/β-actin的OD灰度比值進行統(tǒng)計分析，D4、D8大鼠與相應(yīng)周數(shù)正常組比較RAGE表達量顯著增加。D8組與D4組大鼠相比較RAGE表達量明顯增加，有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.糖尿病大鼠心肌結(jié)構(gòu)發(fā)生病理性損傷，光鏡下顯示：心肌細胞