乳牙牙周膜干細胞在乳牙生理性根吸收中的作用研究.pdf

1、牙根吸收是牙根結構的分解和破壞，目前尚無統(tǒng)一分類。根據牙根吸收的部位和病因可分為表面性吸收、炎癥性吸收、替代性吸收或內吸收、外吸收以及牙髓牙周感染、正畸治療等導致的牙根吸收等；依據病理生理學的分類可分為病理性根吸收和生理性根吸收。乳牙生理性根吸收是兒童乳恒牙替換期的一種自然生理現(xiàn)象，乳牙的牙根是人體唯一生理性吸收并且消失的硬組織，關于乳牙生理性根吸收機制，有學者指出可能與繼承恒牙萌出時的壓力、炎癥環(huán)境或咬合創(chuàng)傷有關，但都尚處于探索階段。

2、
　　發(fā)育相關的間充質干細胞及其所在的微環(huán)境是維護骨骼和牙齒正常發(fā)育的基礎。研究發(fā)育相關干細胞在乳牙生理性根吸收中的作用，對于進一步認識這一生理過程有著重要的生理意義。本實驗分離、培養(yǎng)鑒定乳牙未吸收期及牙根吸收各階段的乳牙牙周膜干細胞（periodontal ligament stem cells，PDLSCs），包括乳牙未吸收期、中度吸收和重度吸收以及恒牙PDLSCs。采用Real-time PCR和Western Blot等方

3、法研究四個時期PDLSCs表達炎癥相關因子IL-1、IL-6、TNF-α；成骨相關基因RUNX-2、ALP、OPG和破骨相關基因RANKL的表達差異，探討PDLSCs在乳牙生理性根吸收中的作用。本課題的研究內容及結果如下：
　　第一部分不同時期乳牙和恒牙牙周膜干細胞生物學特性比較
　　分離、培養(yǎng)鑒定乳牙未吸收，中度吸收和重度吸收三個時期的乳牙PDLSCs。通過研究細胞自我更新能力、多向分化能力和流式細胞儀檢測鑒定其來源。實驗

4、結果顯示：各個時期的乳牙PDLSCs與恒牙PDLSCs形態(tài)相似，均呈旋渦狀、放射狀生長，細胞多為梭形，核呈卵圓形位于胞質中央；MTT和克隆形成率的結果顯示，乳牙PDLSCs細胞活力和增殖能力高于恒牙PDLSCs，乳牙根吸收中重度期PDLSCs的細胞活力和增殖能力較恒牙及未吸收期的乳牙PDLSCs高；各個時期的PDLSCs向在體外誘導條件下均具有多向分化能力，其中乳牙根中重度吸收期的PDLSCs成骨、成脂方向分化能力較強；流式細胞儀表型鑒

5、定顯示各期乳牙牙周膜間充質來源的表面標志物CD146和CD90均為陽性，造血系來源的標志物CD34和CD45均為陰性。以上結果表明本研究分離得到的干細胞為間充質來源的干細胞，與恒牙PDLSCs相比具有更強的自我更新和多向分化能力，是一種理想的種子細胞。
　　第二部分不同時期牙周膜干細胞炎癥、成骨和破骨相關因子的實驗研究
　　分別分離、培養(yǎng)乳牙牙根未吸收、中度吸收和重度吸收期的乳牙PDLSCs，以恒牙PDLSCs作為對照，比較

6、在乳牙生理性根吸收各階段牙周膜干細胞炎癥、成骨及破骨相關基因和蛋白表達的變化。Real-time PCR結果顯示，炎癥相關因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表達隨著根吸收的進行呈上升趨勢。成骨相關基因RUNX-2和ALP的表達與根吸收呈正相關。破骨相關基因RANKL的表達亦呈現(xiàn)上調趨勢，而成骨相關因子OPG呈下調趨勢，最終導致反應細胞破骨/成骨能力的RANKL/OPG的比值呈不斷上升趨勢；WerternBlot結果進一步證實這一結論