沒(méi)食子酸通過(guò)大鼠GST促進(jìn)鹵代芳香烴類毒物的代謝.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:誤食水果和蔬菜中殘留農(nóng)藥對(duì)人體帶來(lái)的毒害作用嚴(yán)重影響著人民的身體健康。近年來(lái),如何解除鹵代芳香烴類農(nóng)藥的毒副作用的研究倍受關(guān)注。正常機(jī)體內(nèi)谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)能催化機(jī)體內(nèi)鹵代芳香烴類毒物與還原性谷胱甘肽(GSH)發(fā)生結(jié)合反應(yīng),增加水溶性而排出體外發(fā)揮解毒的功效。任何增加體內(nèi)酶活性的因素均有利于促進(jìn)毒物的代謝排出。葡萄、茶葉等果蔬品種富含沒(méi)食子酸,有文獻(xiàn)報(bào)道沒(méi)食子酸具有針對(duì)有機(jī)毒物的解毒作用,但解毒機(jī)制不明確,相關(guān)的研究報(bào)道較

2、少。本文從體內(nèi)、體外代謝酶動(dòng)力學(xué)研究這一新的視角出發(fā),以大鼠為研究對(duì)象,探索沒(méi)食子酸是否能夠通過(guò)影響機(jī)體內(nèi)解毒酶(GST)的活性,從而改變體內(nèi)鹵代芳香烴類毒物的代謝速率,揭示其解毒排毒分子機(jī)制,為保障人們健康飲食,增強(qiáng)體質(zhì),提升機(jī)體解毒排毒的能力提供重要的理論指導(dǎo)。
  方法:首先建立體外鼠肝微粒體中GST評(píng)價(jià)的孵育體系及酶活性測(cè)定HPLC分析方法,求算Vmax、Km及代謝清除率(CLint)等動(dòng)力學(xué)參數(shù),用于分析沒(méi)食子酸對(duì)GST

3、酶的動(dòng)力學(xué)的影響,并對(duì)相關(guān)分子機(jī)制進(jìn)行研究。通過(guò)IC50(.)Ki等參數(shù)評(píng)價(jià)沒(méi)食子酸對(duì)以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)為代表的毒物的體外代謝的影響,初步判斷二者發(fā)生相互作用的模式為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。其次建立大鼠體內(nèi)藥物代謝評(píng)價(jià)體系,創(chuàng)建以DCNB為探針底物測(cè)定血藥濃度的氣相色譜分析方法,通過(guò)DAS3.2.1繪制DCNB的藥時(shí)曲線并計(jì)算其動(dòng)力學(xué)參數(shù),用于分析沒(méi)食子酸對(duì)體內(nèi)鹵代芳香烴類毒物的代謝的影響。為了進(jìn)一步探查沒(méi)食子酸在大鼠體內(nèi)

4、對(duì)GST的綜合影響,采用Western Blot方法考察了肝、腎、腸中mGST-1的蛋白表達(dá),以期全面分析評(píng)價(jià)沒(méi)食子酸在體內(nèi)對(duì)GST的整體影響結(jié)果。
  結(jié)果:大鼠肝微粒體GST的體外動(dòng)力學(xué)分析顯示,GST酶的Vmax為85.45 nmol·min-1·mg protein-1; Km為15.09μmol·L-1;Clint為5.66 mL·min-1·mg protein-1。沒(méi)食子酸在體外明顯存在非時(shí)間依賴性抑制GST酶活性(

5、IC50=14.79μM)。經(jīng)超速離心和加入10Km的CDNB后,酶活性得到恢復(fù),Ki為9.49μM。表明在體外沒(méi)食子酸是GST中等強(qiáng)度抑制劑,屬于可逆性抑制中的混合型機(jī)制。顯示可能存在降低CDNB等毒物的代謝作用。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,沒(méi)食子酸干預(yù)的實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比AUC0-∞從10363.5±1945.6降低到7075.1±1433.2。而實(shí)驗(yàn)組CL/F(14.1±3.4)明顯高于對(duì)照組(9.6±2.3)。在蛋白表達(dá)分析實(shí)驗(yàn)中,沒(méi)食子酸干

6、預(yù)的實(shí)驗(yàn)組中肝、腎、腸的GST蛋白表達(dá)明顯強(qiáng)于對(duì)照組。
  結(jié)論:本文首次從Ⅱ相代謝酶的動(dòng)力學(xué)分析角度,考察了沒(méi)食子酸通過(guò)對(duì)GST酶動(dòng)力學(xué)的影響而發(fā)揮其對(duì)鹵代芳香烴類農(nóng)藥的解毒機(jī)制。揭示了沒(méi)食子酸在體外雖然具有對(duì)GST的抑制作用,但在大鼠體內(nèi)其可以在各器官中通過(guò)大量誘導(dǎo)GST表達(dá),增加體內(nèi)酶的絕對(duì)含量達(dá)到促進(jìn)對(duì)鹵代芳香烴類農(nóng)藥的代謝清除效果。從而有效發(fā)揮沒(méi)食子酸解毒作用。提示日常生活中多食用富含沒(méi)食子酸的食物能有效加快肌體對(duì)農(nóng)藥殘

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