CyclinB1-Cdc2和Polo-like kinase1在子宮內膜異位癥發(fā)病中的作用研究.pdf

1、研究背景:子宮內膜異位癥是一種主要發(fā)生在育齡期婦女的常見婦科疾病.它表現出來的盆腔疼痛和不孕等臨床癥狀已經嚴重影響了現代女性的身心健康.近年來日益受到研究者的廣泛關注.子宮內膜異位癥的發(fā)病率在普通人群中為10﹪-15﹪.目前確切的病因和病理機制仍不清楚.研究發(fā)現,子宮內膜異位癥與卵巢癌的發(fā)生高度相關,甚至被很多學者認為是卵巢癌的癌前病變.眾所周知,腫瘤的主要特征是增生和惡性轉化.而細胞增生和惡性轉化都是控制細胞分裂(即細胞周期)異常引起

2、的后果.研究證實,cvclinB1/cdc2及PLK1是控制細胞周期的2個關鍵性調節(jié)因子,在腫瘤的增生和惡性轉化過程中起了重要作用.已經在多種腫瘤組織中發(fā)現有CyclinB1/cdc2及PLK1的表達異常.正因為子宮內膜異位癥與腫瘤有著諸多的相似之處,因此我們不難想到,這些細胞周期調節(jié)蛋白是否也在子宮內膜異位癥的患者中表達異常而且在其發(fā)病中起了某種重要作用呢?目前對一些在細胞周期調節(jié)中控制G1/S期轉化的細胞周期蛋白與子宮內膜異位癥的關

3、系已經有了一些研究,如cyclinA、cvclinD和CvclinE等,但是對細胞周期調節(jié)中控制G2/M期轉化的細胞周期蛋白與子宮內膜異位癥的相關性研究目前尚未見報道. 本研究是國際上首次對CvclinB1/Cdc2和PLK1與子宮內膜異位癥發(fā)生的相關性進行研究和報道,目的是探討子宮內膜異位癥的病理發(fā)生機制,為尋求子宮內膜內異癥新的預防和治療方法提供思路. 第一部分 子宮內膜異位癥患者子宮內膜細胞與正常人子宮內膜細胞體外

4、生長特性的比較 目的:通過比較子宮內膜異位癥患者異位及在位內膜細胞與正常人子宮內膜細胞體外生長特性的比較來探討子宮內膜異位癥的發(fā)病機理. 材料與方法:取因子宮內膜異位癥行開腹或腹腔鏡手術的內異癥患者異位內膜21例,同時取行開腹手術的內異癥患者在位內膜6例,對照組因子宮漿膜下肌瘤行開腹手術切除子宮的正常女性在位子宮內膜6例.患者年齡21-47歲,術前6個月未用過激素治療,無全身性合并癥.采用體外細胞培養(yǎng)結合細胞生長計數和細

5、胞分裂指數計數的方法對三組子宮內膜細胞的體外生長特性進行比較. 結論:子宮內膜異位癥患者在位及異位內膜有著與正常人子宮內膜不同的增殖能力,這種增高的細胞增殖能力可能是子宮內膜異位癥發(fā)生的病理基礎,可能與異位內膜在腹腔中的粘附、存活及生長有關. 第二部分 CyclinBl、Cdc2及Polo-like kinasel在子宮內膜異位癥患者子宮內膜組織中的表達 目的:通過細胞周期調節(jié)蛋白CyclinBl及其調節(jié)蛋白C

6、dc2以及Polo-likekinasel(PLK1)在子宮內膜異位癥中的表達,探討CyclinB1/Cdc2和PLK1在子宮內膜異位癥發(fā)生中的作用. 材料與方法:子宮內膜異位癥患者(以下簡稱內異癥)異位內膜29份(增生期17份、分泌期12份),同時獲取內異癥在位內膜20份(增生期11份、分泌期9份).正常人子宮內膜30例(增生期16份、分泌期14份).采用RT-PCR、蛋白免疫印跡(Western blotting)以及免疫組

7、織化學的方法檢測上述三組子宮內膜組織中CyclinB1、Cdc2以及PLK1的表達.同時檢測了Ki-67在三組子宮內膜組織中免疫組化的表達.采用直線相關分析法對Ki-67免疫組化的表達結果與CyclinB1和PLK1的蛋白表達水平進行相關分析. 結論:CyclinBl和PLKl在子宮內膜異位癥患者的異位和在位子宮內膜組織上mRNA和蛋白質的表達水平均高于正常人子宮內膜組織.Ki-67在三組子宮內膜組織中免疫組化的陽性表達率與Cy

8、clinBl及TLPLKl的蛋白表達有較好的相關性.因此CyclinBl和PLKl可能參與了子宮內膜異位癥的病理發(fā)生,而且可能和Ki-67一樣,都可以用來預測子宮內膜細胞的增殖能力. 第三部分 CyclinBl/Cdc2抑制劑Alsterpaullone對子宮內膜異位癥患者子宮內膜細胞體外生長的影響 目的:進一步證明CyclinBl/Cdc2在子宮內膜異位癥患者子宮內膜細胞增殖中的作用,以期尋找治療子宮內膜異位癥的新途徑

9、和新方法. 材料與方法:材料獲取的方法及數量同第一部分,三組子宮內膜細胞分別設置處理組和對照組.采用細胞培養(yǎng)結合細胞分裂指數計數、噻唑藍比色法(MTT)、蛋白免疫印跡及流式細胞儀細胞周期分析等方法檢測了給Alsterpaullone(Alp)前后三組子宮內膜細胞的體外生長情況及CyclinB1和PLK1的蛋白表達量的變化. 結論:CyclinB1/Cdc2在調控子宮內膜異位癥患者在位和異位內膜細胞的增殖生長中起了重要作用

10、.臨床中將來有可能利用抑制劑Alp來達到治療或輔助治療子宮內膜異位癥的作用. 第四部分 PLK1 siRNA小分子對子宮內膜異位癥患者子宮內膜細胞體外生長的影響 目的:進一步證明PLK1在子宮內膜異位癥患者在位和異位內膜細胞增殖中的作用,以期尋找治療子宮內膜異位癥的新途徑和新方法. 材料與方法:材料的獲取方法及數量同第一部分.針對人類PLK1基因為靶位點設計合成siRNA片段,以慢病毒為載體,對子宮內膜異位癥在位

11、、異位子宮內膜細胞及正常人子宮內膜細胞感染48h(三組細胞分別設置處理組和對照組),觀察三組細胞病毒感染前后細胞的體外生長變化及cvclinB1和PLK1蛋白表達量的變化.采用的方法有流式細胞儀細胞生長周期分析及蛋白免疫印跡技術. 結論:PLK1 siRNA對子宮內膜異位癥患者的子宮內膜PLK1基因表達具有明顯的消除作用,在細胞水平上顯著抑制了異位癥內膜細胞的分裂和生長.siRNA敲除PLK1將來有可能成為治療子宮內膜異位癥新的