降香檀葉中鷹嘴豆芽素A和染料木素提取純化工藝研究.pdf

1、降香黃檀作為傳統(tǒng)中藥的藥用部位是其根部和心材，含有大量的異黃酮類成分，而研究結果表明降香黃檀的可再生部位——葉子中也含有豐富的異黃酮類成分，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種活性，其中以鷹嘴豆芽素A和染料木素為代表。因此，本文建立了同時檢測鷹嘴豆芽素A和染料木素的高效液相色譜(HPLC)分析方法，并以降香檀葉為原料，建立了微波輔助酶法提取葉子中鷹嘴豆芽素A和染料木素的提取工藝，并通過大孔吸附樹脂、中壓快速制備柱色譜等技術手段對降香檀葉中的兩

2、種異黃酮成分進行富集、分離，建立了一套完整的提取與分離降香檀葉中鷹嘴豆芽素A和染料木素的工藝。本研究為合理、高效的利用降香檀資源提供了科學依據(jù)，為我國降香資源的深度利用和開發(fā)提供了的數(shù)據(jù)支持。主要研究結果如下:
　　1.建立了降香檀葉中鷹嘴豆芽素A和染料木素的HPLC分析方法。
　　色譜柱:HIQ Sil C18V(250 mm×4.6 mm I.D.，5μm)，流動相的為乙腈(A):0.1％甲酸水(B)，梯度洗脫，條件為:

3、0-5 min，5-10％(A);5-10 min，10-28％(A);10-30min,28-60％(A);30-35 min,60％(A);35-37 min,60-80％(A);37-42 min,80-100％(A);42-55 min，100％(A)，流速:1.0 mL/min，進樣量:5μL，柱溫:30℃，檢測波長:260nm。
　　2.通過響應面法考察了微波輔助酶提取法對降香檀葉中鷹嘴豆芽素A和染料木素提取率的影響，

4、確定了最佳的提取工藝參數(shù)為:
　　纖維素酶量:3.5 mg/g
　　pH值:5.2
　　提取時間:15 min
　　提取溫度:34℃
　　微波功率:300W
　　經(jīng)以上篩選的優(yōu)化條件處理后，降香檀葉中鷹嘴豆芽素A和染料木素的提取率分別為2.012和1.023mg/g，與熱回流提取法相比提取率提高了17.45％，63.94％;與超聲提取法相比提取率提高了5.07％，13.79％。
　　3.確定了A

5、L-2大孔吸附樹脂快速富集鷹嘴豆芽素A和染料木素的工藝。
　　大孔吸附樹脂富集的最佳條件:
　　樹脂類型: AL-2型
　　樹脂與樣品量的比:5∶1
　　在上述的最佳條件下，經(jīng)過AL-2型大孔吸附樹脂富集處理后，鷹嘴豆芽素A的含量從4.12％增加到27.20％，提高了6.60倍，收率為87.13％;染料木素的含量從1.06％增加到6.79％，提高了6.41倍，收率為84.60％
　　4.通過中壓快速制備柱色

6、譜儀，將AL-2型大孔吸附樹脂處理后的樣品中的鷹嘴豆芽素A和染料木素分離出來，確定了中壓快速制備柱色譜分離純化降香檀葉中的鷹嘴豆芽素A和染料木素的工藝，最佳條件如下:
　　固定相類型:正相硅膠
　　洗脫體系及洗脫條件:n-正己烷-乙酸乙酯體系;0-8 min，n-正己烷-乙酸乙酯(10∶1，v/v);8-35 min，n-正己烷-乙酸乙酯(6∶1，v/v)
　　樣品與硅膠量的比:1.3∶40
　　流速:50 mL

7、/min
　　在上述的優(yōu)化條件下，進過一次中壓快速制備拄色譜分離后，鷹嘴豆芽素A和染料木素的純度能達到95％以上，該過程的收率分別為80.13％和73.11％。
　　經(jīng)過微波輔助酶提取、大孔吸附樹脂富集、中壓快速制備柱色譜分離等處理后，鷹嘴豆芽素A的純度達到95％以上，總回收率為69.82％;染料木素的純度也達到了95％以上，總回收率為61.85％，由1.3g富集后的產(chǎn)物可得到282.98 mg鷹嘴豆芽素A和64.52 mg