BH3模擬物協(xié)同紫杉醇治療慢性粒細胞白血病(CML)的分子機制研究.pdf

1、碩士學位論文BH3模擬物協(xié)同紫杉醇治療慢性粒細胞白血病(CML)的分子機制研究ThemechanismofsynergyofBH3mimeticsandpaclitaxelinCnrOnlCmVeloldleUKemiall■學號：一三!坦翟塹大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理工大學碩士學位論文摘要紫杉醇作為微管蛋白抑制劑，能夠克服CML中p53和Fas缺失導致的凋亡缺陷，通過內源凋亡通路誘導慢性

2、粒細胞白血病(Chronicmyeloidleukaemia；CML)細胞凋亡。因此，紫杉醇可以作為治療CML的候選化療藥。內源凋亡通路受Bcl2家族抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白的相互作用平衡的調控，而CML細胞中異常激活的MAPK和STAT，能夠上調Bcl2家族抗凋亡蛋白Bcl一2、BclXL和Mcl1，抑制紫杉醇誘導的凋亡發(fā)生。因此，拮抗Bcl2家族抗凋亡蛋白的藥物，能夠與紫杉醇協(xié)同殺傷CML細胞。BH3模擬物利用小分子化學基團模擬BH3

3、一only蛋白上重要的氨基酸殘基，占據(jù)Bcl一2家族抗凋亡蛋白的功能區(qū)：BH3溝槽，發(fā)揮抗腫瘤活性。ABT737是進入臨床期的BH3模擬物之一，對Bcl2／BclXL的親和力比較強，但是不能結合Mcl1蛋白；我們課題組在前期研究中發(fā)現(xiàn)和證明了一個特異的BH3模擬物S1，能以高親和力結合Mcl1(Ki=58nM和Bcl2(Ki=310nM)兩個蛋白。本論文對比了ABT一737和S1聯(lián)合紫杉醇治療CML的作用，對BH3模擬物與紫杉醇的協(xié)同機

4、制進行了分子水平的研究。首先以慢性粒細胞白血病細胞系K562作為研究對象，通過MTT實驗，根據(jù)聯(lián)合指數(shù)分析等方法證明，BH3模擬物和紫杉醇對K562細胞有協(xié)同殺傷作用(CI1)。通過檢測Caspase8／9酶原激活和細胞色素C的釋放證明，它們的協(xié)同作用是通過內源性凋亡通路誘導K562細胞凋亡。通過Bcl2、BclXL和Mcl1RNA干擾實驗，證明Mcl一1蛋白在BH3模擬物和紫杉醇協(xié)同作用中發(fā)揮了最關鍵的作用。Western免疫印記和免

5、疫共沉淀實驗證實，ABT737和S1通過不同的分子機制，協(xié)同紫杉醇拮抗Mcl—l蛋白：ABT737通過上調Bim蛋白水平，解離Mcl1／Bak二聚體，協(xié)同紫杉醇誘導凋亡發(fā)生；Sl則通過直接結合Mcl1蛋白和直接干擾Mcl一1／Bim和Mcl1／Bak二聚體，協(xié)同誘導凋亡。進一步通過聯(lián)合JNK抑制劑證明，JNK／Bim通路的激活是ABT737協(xié)同紫杉醇上調Bim的分子機制。之后，在三個白血病原代培養(yǎng)的病例中，ABT737、Sl與紫杉醇的協(xié)