動(dòng)物性食品源大腸桿菌對(duì)抗生素與消毒劑耐藥性及PFGE分型研究.pdf

1、大腸桿菌(Escherichia coli)是國際公認(rèn)的食品衛(wèi)生和耐藥性監(jiān)測(cè)重要的指示菌，可以通過食物鏈傳播，并感染人和動(dòng)物，導(dǎo)致腹瀉，感染致病性較強(qiáng)的血清型時(shí)還能致命?？股厥穷A(yù)防和治療大腸桿菌等病原菌感染的重要手段，近年來由于抗生素的廣泛及不合理使用，食源性大腸桿菌對(duì)抗生素耐藥性增強(qiáng)。為了降低傳染的發(fā)生、阻止抗生素耐藥菌的進(jìn)一步危害，環(huán)境消毒控制成為控制病原菌傳播的主要措施，目前，季銨鹽類(Quaternary Ammonium C

2、ompounds，QACs)消毒劑已被廣泛用于養(yǎng)殖、食品加工等環(huán)境的消毒，然而消毒劑使用的增多是否會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌對(duì)消毒劑的耐藥也成為眾多學(xué)者關(guān)心的問題，已有報(bào)道發(fā)現(xiàn)抗生素可以與季銨鹽類消毒劑共同耐藥，但目前國內(nèi)關(guān)于動(dòng)物性食品源大腸桿菌對(duì)消毒劑耐藥及與抗生素共同耐藥的研究報(bào)道較少。
　　本研究從四川省部分市縣采集肉類樣品，分離大腸桿菌，并利用形態(tài)學(xué)、生理生化及16S rDNA鑒定。按照CLSI推薦方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)用藥敏紙片法測(cè)定大腸桿

3、菌對(duì)11種不同抗生素的敏感性，應(yīng)用瓊脂稀釋法測(cè)定大腸桿菌對(duì)季銨鹽類消毒劑(QACs)的MIC值，并應(yīng)用PCR方法檢測(cè)QACs耐藥基因和1型整合子，分析大腸桿菌對(duì)消毒劑耐藥性與抗生素耐藥表型之間的關(guān)系，對(duì)含有可移動(dòng)遺傳元件介導(dǎo)的QACs耐藥基因的菌株P(guān)FGE分型，并選擇部分菌株進(jìn)行接合試驗(yàn)。本研究主要開展了三個(gè)方面的研究:
　　1動(dòng)物性食品源大腸桿菌的分離及對(duì)抗生素的耐藥性
　　2009-2013年從四川省不同地區(qū)采集肉類樣品

4、328份包括:豬肉203份，牛肉66份，雞肉59份，分離培養(yǎng)基分離，16S rDNA鑒定出大腸桿菌255株(77.74％):雞肉50株(84.75％)，豬肉161株(79.31％)，牛肉44株(66.67％)。采用紙片擴(kuò)散法對(duì)11種常用藥敏紙片進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果顯示:218株(85.49％)大腸桿菌對(duì)11種抗生素表現(xiàn)出不同程度的耐藥性，特別是氨芐西林，磺胺甲惡唑，四環(huán)素。多重耐藥分析結(jié)果顯示，255株動(dòng)物性食品源大腸桿菌中，126株(4

5、9.41％)大腸桿菌為多重耐藥菌株，各種耐藥譜型中，3重耐藥菌株所占比例最大為13.73％(n=35)，其次為5重耐藥為13.33％(n=34)，優(yōu)勢(shì)耐藥譜型分別為S3(n=21); S3-TET(n=18); TET(n=16);AMP-S3-TET(n=13)。
　　2動(dòng)物性食品源性大腸桿菌對(duì)QACs消毒劑的耐藥性
　　瓊脂稀釋法測(cè)定255株大腸桿菌對(duì)三種季銨鹽消毒劑的MIC值，PCR擴(kuò)增10種季銨鹽類消毒劑耐藥基因，檢

6、測(cè)255株大腸桿菌的1型整合子的流行情況，分析其與大腸桿菌多重耐藥的關(guān)系，選取部分可移動(dòng)遺傳元件介導(dǎo)的消毒劑耐藥基因陽性菌株開展接合試驗(yàn)。結(jié)果表明各消毒劑MIC范圍是:CPC，8-512 mg/L; CTAB，16-512mg/L; BC，16-1024mg/L; DDAC4-1024 mg/L。QACs耐藥基因檢出率為:ydgE(87％;221/255),mdfA(85％;218/255),sugE(c)(83％;212/255),y

7、dgF(80％;203/255),emrE(78％;200/255),qacE△1(20％;50/255),qacF(18％;46/255),sugE(p)(7％;7/255),未檢出qacE、qacG。供試大腸桿菌1型整合子檢出率較低，255株大腸桿菌僅66株檢出(25.88％)。接合試驗(yàn)證實(shí)qacF,qacE△1，sugE(P)的傳播性。所有抗生素耐藥菌中qacF檢出率顯著高于抗生素敏感菌(p＜0.05)，豬肉源中大腸桿菌中qacE

8、△1基因與抗生素耐藥顯著相關(guān)(p＜0.05）。
　　3質(zhì)粒介導(dǎo)的消毒劑耐藥基因陽性菌株的PFGE分型
　　對(duì)含有sugE(p)、qacE△1或qacF的96株大腸桿菌進(jìn)行PFGE分型。結(jié)果表明96株大腸桿菌可以分為13個(gè)型73個(gè)亞型，耐藥大腸桿菌來源與肉類采集地點(diǎn)（不同超市）相關(guān)，部分同源性較高的菌株中，抗生素耐藥譜型相似。部分菌株消毒劑耐藥基因與PFGE譜型相關(guān)，A、B型大腸桿菌中主要基因組合為emrE-mdfA-sugE

9、(c)-ydgE-ydgF-qacF，C型中mdfA-sugE(c)-ydgE-ydgF-qacE△1基因組合流行率較高。
　　本研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)物性食品源大腸桿菌污染情況較嚴(yán)重，菌株對(duì)抗生素的耐藥率及多重耐藥率相對(duì)較低，大腸桿菌對(duì)季銨鹽類消毒劑具有較高M(jìn)IC值，消毒劑耐藥基因檢出率高，消毒劑耐藥基因qacE△1、qacF與抗生素耐藥具有相關(guān)性。耐藥大腸桿菌來源與肉類采集地點(diǎn)相關(guān)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物性食品源大腸桿菌污染及耐藥性監(jiān)測(cè)，并需注重肉