負(fù)壓吸引后兔視網(wǎng)膜BDNF-TrkB濃度變化及基因表達(dá)譜的研究.pdf

1、目的觀察LASIK術(shù)中負(fù)壓吸引對兔視網(wǎng)膜BDNF和TrkB濃度的影響,從神經(jīng)營養(yǎng)因子被剝奪的角度分析LASIK術(shù)中負(fù)壓吸引引起RGCs凋亡的機(jī)制；應(yīng)用基因芯片技術(shù)檢測兔視網(wǎng)膜基因譜的表達(dá)變化,探討負(fù)壓吸引引起RGCs凋亡可能的分子學(xué)機(jī)制。方法1.48只健康新西蘭大耳白兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)對照組、負(fù)壓吸引20s組、45s組和3min組。實(shí)驗(yàn)對照組只進(jìn)行激光治療。負(fù)壓吸引各組先用負(fù)壓發(fā)生器吸引眼角鞏膜緣,分別持續(xù)20s、45s及3min,分別于術(shù)

2、后即刻(0d)、7d、10d和14d各時(shí)間點(diǎn)處死實(shí)驗(yàn)動物,取視網(wǎng)膜組織檢測BDNF及其受體TrkB的濃度變化。2.4只健康新西蘭大耳白兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)對照組和負(fù)壓吸引3min組。負(fù)壓吸引3min組設(shè)術(shù)后即刻(0d)、7d和10d三個(gè)觀察點(diǎn),取視網(wǎng)膜組織提取總RNA,利用基因芯片技術(shù)檢測視網(wǎng)膜基因譜的表達(dá)變化,并分析差異表達(dá)基因。結(jié)果1.負(fù)壓吸引視網(wǎng)膜BDNF和TrkB濃度動態(tài)變化:與實(shí)驗(yàn)對照組比較,負(fù)壓吸引20s組和45s組視網(wǎng)膜BDNF

3、和TrkB濃度變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而負(fù)壓吸引3min組視網(wǎng)膜BDNF和TrkB濃度都有所增加,與實(shí)驗(yàn)對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且都于術(shù)后7d達(dá)到最高峰,10d則明顯下降,14d回到接近實(shí)驗(yàn)對照組水平。負(fù)壓吸引3min組各時(shí)間點(diǎn)BDNF和TrkB濃度變化與實(shí)驗(yàn)對照組比較,術(shù)后即刻和7d差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),術(shù)后10d和14d差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2.負(fù)壓吸引后視網(wǎng)膜基因譜的表達(dá)變化:

4、負(fù)壓吸引3min術(shù)后即刻差異表達(dá)基因共704條。上調(diào)基因485條,其中已知基因48條；下調(diào)基因219條,其中已知基因23條。對71條已知基因進(jìn)行功能篩選,共篩選出凋亡相關(guān)基因6條,上調(diào)5條,下調(diào)1條,上調(diào)表達(dá)較高的基因是CRYAA、CRYAB和TLR3,下調(diào)表達(dá)較高的基因是KRT18。負(fù)壓吸引3min術(shù)后7d差異表達(dá)基因共482條。上調(diào)基因178條,其中已知基因13條；下調(diào)基因304條,其中已知基因33條。對46條已知基因進(jìn)行功能篩選,

5、共篩選出凋亡相關(guān)基因4條,上調(diào)1條,下調(diào)3條,上調(diào)表達(dá)較高的基因是CRYAB,下調(diào)表達(dá)較高的基因是IL1-BETA和IL1R1。負(fù)壓吸引3min術(shù)后10d差異表達(dá)基因共402條。上調(diào)基因213條,其中已知基因25條；下調(diào)基因189條,其中已知基因26條。對51條已知基因進(jìn)行功能篩選,共篩選出凋亡相關(guān)基因6條,上調(diào)4條,下調(diào)2條,上調(diào)表達(dá)較高的基因是CRYAB、CRYBA3和CRYBB2,下調(diào)表達(dá)較高的基因是IL1-BETA和IL1R1。

6、在差異表達(dá)基因中除凋亡相關(guān)基因外還有能量代謝、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、信號傳導(dǎo)、發(fā)育、解毒抗氧化、免疫反應(yīng)、細(xì)胞運(yùn)動、細(xì)胞組織生物發(fā)生、分化和細(xì)胞粘附等相關(guān)基因。結(jié)論1.LASIK術(shù)中負(fù)壓吸引引起的瞬時(shí)高眼壓,可以導(dǎo)致視網(wǎng)膜中BDNF和TrkB濃度變化,但這種改變?yōu)榭赡娴?負(fù)壓吸引持續(xù)時(shí)間越長改變越明顯。說明神經(jīng)營養(yǎng)因子被剝奪是高眼壓引起RGCs凋亡的機(jī)制之一。2.長時(shí)間(3min)負(fù)壓吸引可使視網(wǎng)膜一些基因表達(dá)水平發(fā)生變化,其中基因表達(dá)差異倍數(shù)較高