施萬細(xì)胞通過BDNF-TrkB信號(hào)通路促進(jìn)SACC嗜神經(jīng)侵襲機(jī)制的研究.pdf

1、涎腺腺樣囊性癌（Salivary adenoid cystic carcinoma, SACC）是最常見的涎腺惡性腫瘤之一，具有嗜神經(jīng)侵襲的特性，區(qū)別于涎腺其它惡性腫瘤。最近研究發(fā)現(xiàn)腦源性神經(jīng)生長因子（Brain-derived Neurotrophic Factor, BDNF）和它的特異性受體酪氨酸激酶受體B（tropomysin-related kinase B, TrkB）在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)過度表達(dá)。課題組前期研究表明 BDN

2、F和 TrkB在涎腺腺樣囊性癌中的呈現(xiàn)高表達(dá)，并證實(shí)了TrkB在涎腺腺樣囊性癌中的表達(dá)強(qiáng)度與其嗜神經(jīng)侵襲程度相關(guān)。
　　典型的EMT過程包括細(xì)胞喪失極性及細(xì)胞間黏附分子，細(xì)胞骨架重組，獲得成纖維樣細(xì)胞表型。多項(xiàng)研究表明，EMT在多種惡性腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。盡管EMT與嗜神經(jīng)侵襲之間的關(guān)系罕有報(bào)道，但是我們有理由推斷，既然EMT能夠賦予腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移、侵襲的能力，它在嗜神經(jīng)侵襲過程中必然發(fā)揮重要作用。越來越多的證據(jù)表明

3、，施萬細(xì)胞樣分化可能是一些神經(jīng)源性惡性腫瘤發(fā)生神經(jīng)侵襲可能機(jī)制之一，腫瘤嗜神經(jīng)侵襲現(xiàn)象可比擬為施萬細(xì)胞對(duì)神經(jīng)組織的親和力。
　　目前，關(guān)于BDNF/TrkB信號(hào)通路、EMT以及Schwann細(xì)胞樣分化之間的關(guān)聯(lián)及其在 SACC嗜神經(jīng)侵襲過程中作用的研究尚未見報(bào)道。本課題通過建立施萬細(xì)胞與SACC細(xì)胞的體外共培養(yǎng)模型，模擬SACC神經(jīng)侵襲過程中兩種細(xì)胞之間的相互作用，證明施萬細(xì)胞通過BDNF/TrkB信號(hào)通路促進(jìn)SACC的EMT和S

4、chwann細(xì)胞樣分化過程，并用臨床SACC標(biāo)本免疫組化實(shí)驗(yàn)加以印證，探討SACC嗜神經(jīng)侵襲的可能分子機(jī)制。
　　第一部分實(shí)驗(yàn)
　　目的：建立腺樣囊性癌細(xì)胞與大鼠施萬細(xì)胞共培養(yǎng)模型，探討細(xì)胞間相互作用時(shí)BDNF、TrkB的表達(dá)變化情況以及K252a對(duì)兩種細(xì)胞表達(dá)BDNF、TrkB的影響。
　　方法：采用Transwell系統(tǒng)建立腺樣囊性癌細(xì)胞與大鼠施萬細(xì)胞共培養(yǎng)模型，共培養(yǎng)72h后， ELISA法檢測各組培養(yǎng)液中BDN

5、F含量， RT-PCR、Western免疫印跡檢測兩種細(xì)胞中BDNF、TrkB表達(dá)情況以及用K252a刺激時(shí)的變化情況。采用SPSS17.0軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：施萬細(xì)胞與SACC細(xì)胞共培養(yǎng)組的培養(yǎng)基中BDNF的濃度顯著高于它們單獨(dú)培養(yǎng)組中BDNF濃度總和；共培養(yǎng)組的施萬細(xì)胞表達(dá)BDNF的量顯著增高，而表達(dá)TrkB的量未見明顯變化；共培養(yǎng)組的SACC細(xì)胞表達(dá)TrkB的量顯著增加，而表達(dá)BDNF的量未見明顯變化

6、；TrkB抑制劑 K252a能夠顯著抑制上述改變；對(duì)照組黏液表皮樣癌細(xì)胞與施萬細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)未發(fā)生類似改變。
　　結(jié)論：BDNF/TrkB信號(hào)通路在施萬細(xì)胞與 SACC細(xì)胞相互作用過程中發(fā)揮重要作用，但其下游通路的分子機(jī)制有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)
　　目的：通過腺樣囊性癌細(xì)胞與大鼠施萬細(xì)胞共培養(yǎng)模型，研究施萬細(xì)胞通過BDNF/TrkB信號(hào)通路促進(jìn)SACC細(xì)胞EMT發(fā)展及其Schwann細(xì)胞樣分化過程。

7、>　　方法：以涎腺腺樣囊性癌SACC-83細(xì)胞系為研究對(duì)象，利用RT-PCR、Western免疫印跡、免疫熒光染色等方法檢測與施萬細(xì)胞共培養(yǎng)的SACC-83細(xì)胞EMT發(fā)展及 Schwann細(xì)胞樣分化相關(guān)分子的表達(dá)變化情況，細(xì)胞攝像及激光共聚焦成像觀察SACC-83細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，劃痕實(shí)驗(yàn)及Transwell嗜神經(jīng)侵襲實(shí)驗(yàn)觀察腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力及神經(jīng)侵襲能力的變化，并通過K252a阻斷BDNF/TrkB信號(hào)通路觀察對(duì)其EMT發(fā)展及Schwa

8、nn細(xì)胞樣分化的影響。采用SPSS17.0軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：與單獨(dú)培養(yǎng)的SACC-83細(xì)胞相比，共培養(yǎng)組的SACC-83細(xì)胞形態(tài)由橢圓形變?yōu)榧忓N形及多角形，細(xì)胞間連接消失，EMT標(biāo)志分子E-cadherin表達(dá)下調(diào)， N-cadherin、Vimentin表達(dá)上調(diào)，腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力及嗜神經(jīng)侵襲能力明顯增強(qiáng)，同時(shí)共培養(yǎng)組的腫瘤細(xì)胞表達(dá)施萬細(xì)胞標(biāo)志分子S100A4、GFAP的量顯著上調(diào)；通過K252a阻斷 B

9、DNF/TrkB信號(hào)通路能夠顯著抑制 SACC-83細(xì)胞的EMT發(fā)展及Schwann細(xì)胞樣分化。
　　結(jié)論：施萬細(xì)胞能夠通過 BDNF/TrkB信號(hào)通路促進(jìn) SACC細(xì)胞的EMT發(fā)展及Schwann細(xì)胞樣分化，腫瘤-神經(jīng)之間的相互作用可能是SACC嗜神經(jīng)侵襲的可能機(jī)制之一。
　　第三部分實(shí)驗(yàn)
　　目的：研究TrkB、E-cadherin和S100A4在涎腺腺樣囊性癌組織中的表達(dá)及其與SACC臨床嗜神經(jīng)侵襲之間的關(guān)聯(lián)。<

10、br>　　方法：采用免疫組化染色檢測187例涎腺腺樣囊性癌和20例正常涎腺組織中TrkB、E-cadherin和S100A4的表達(dá)情況，并分析其與SACC臨床嗜神經(jīng)侵襲之間的關(guān)聯(lián)。采用SPSS17.0軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：與正常涎腺組織相比，SACC侵犯的外周神經(jīng)組織周圍，TrkB、S100A4的染色強(qiáng)度顯著增高，E-cadherin的染色強(qiáng)度顯著減弱，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；SACC標(biāo)本中 TrkB以及 S10