氧化異阿樸菲-硫辛酸雙分子雜合體抗AD作用及機(jī)制研究.pdf

1、隨著人類(lèi)平均壽命的逐年增加，全世界范圍內(nèi)的阿爾茨海默病發(fā)病率顯著升高，已嚴(yán)重威脅老年人的身體健康。阿爾茨海默病普遍認(rèn)同的發(fā)病機(jī)制包括膽堿能假說(shuō)、β-淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說(shuō)和氧化應(yīng)激假說(shuō)。而目前認(rèn)為抗膽堿酯酶抑制劑是最有效治療藥物，其主要作用靶點(diǎn)為乙酰膽堿酯酶的活性位點(diǎn)。近年來(lái)，隨著乙酰膽堿酯酶外周陰離子位點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)及其促進(jìn)淀粉樣蛋白沉積作用被揭示，尋找或合成針對(duì)乙酰膽堿酯酶雙位點(diǎn)抑制劑以及偶聯(lián)抗氧化基團(tuán)的多位點(diǎn)抑制劑成為抗阿爾茨海默病藥物研究

2、熱點(diǎn)。
　　本課題組前期體外試驗(yàn)證實(shí)蝙蝠葛提取物氧化異阿樸菲類(lèi)生物堿及其化學(xué)修飾衍生物具有良好的抗阿爾茨海默病作用，主要作用位點(diǎn)為乙酰膽堿酯酶外周陰離子位點(diǎn)，本研究利用化學(xué)合成氧化異阿樸菲-9-位修飾物與硫辛酸雙分子雜合體，通過(guò)體外、體內(nèi)試驗(yàn)，探究氧化異阿樸菲-硫辛酸雙雜合體分子的抗AD活性及其作用機(jī)制，為后期的新藥開(kāi)發(fā)提供初步試驗(yàn)依據(jù)。
　　目的:探究氧化異阿樸菲-硫辛酸雙雜合體分子的抗AD活性及其作用機(jī)制，為后期的新藥開(kāi)

3、發(fā)提供初步試驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:(1)體外試驗(yàn):
　　a.購(gòu)買(mǎi)商品化的AChE、BuChE，利用改良Ellman法檢測(cè)氧化異阿樸菲-硫辛酸雙雜合體分子抗膽堿酯酶活性;
　　b.利用培養(yǎng)的細(xì)胞，MTT法檢測(cè)氧化異阿撲菲-硫辛酸雙分子雜合體細(xì)胞毒性及對(duì)H2O2損傷的保護(hù)作用。
　　(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn):建立Aβ42轉(zhuǎn)基因果蠅模型，設(shè)立對(duì)照組、溶劑對(duì)照組、模型組、不同濃度梯度的給藥組，觀察以下指標(biāo):
　　1)果蠅生存率

4、、攀爬能力;
　　2)檢測(cè)果蠅腦組織SOD、MDA水平，衡量果蠅腦組織氧化應(yīng)激水平;
　　3)檢測(cè)果蠅腦組織ATP含量，衡量果蠅腦組織線粒體損傷水平;
　　4)果蠅腦組織切片HE染色，比較病理?yè)p傷程度。收集數(shù)據(jù)，作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果與結(jié)論:本研究發(fā)現(xiàn)化合物8-11，細(xì)胞毒性低，體外都具有不同程度地抗AChE活性，其中以化合物8、9為甚?；衔?-11作用于Aβ42轉(zhuǎn)基因果蠅，顯著降低果蠅腦組織氧化應(yīng)激水平，減