α-硫辛酸、綠原酸拮抗體內(nèi)氧化應(yīng)激的分子機(jī)制研究.pdf

1、第一部分:α-硫辛酸拮抗環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的評價(jià)及相關(guān)分子機(jī)制研究
　　 環(huán)磷酰胺(CYP)是臨床上廣泛用于抗腫瘤的一類藥物，本品的抗瘤譜較廣，毒性比其他氮芥小，一些病例觀察到有膀胱毒性，可能與其代謝產(chǎn)物丙烯醛有關(guān)。出血性膀胱炎(HC)是一種限制環(huán)磷酰胺臨床使用劑量的主要毒副作用。目前臨床上主要用美司鈉（2-巰乙基磺酸鈉）來緩解出血性膀胱炎這種副作用，盡管美司鈉在臨床上被廣泛用來治療出血性膀胱炎，但臨床上發(fā)現(xiàn)使用美司鈉并不能完

2、全緩解這種膀胱毒性，在使用高劑量環(huán)磷酰胺時(shí)，出血性膀胱炎仍有較高的發(fā)病率。
　　 有研究表明環(huán)磷酰胺的這種膀胱毒性與大量產(chǎn)生的活性氧(ROS)和活性氮(RNS)有關(guān)。炎癥過程中產(chǎn)生的大量RNS和ROS會(huì)引起氧化應(yīng)激，通過脂質(zhì)過氧化，蛋白質(zhì)變性，DNA損傷等機(jī)制引起細(xì)胞損傷和凋亡。雖然，目前國內(nèi)外對環(huán)磷酰胺引起氧化應(yīng)激及使用抗氧化劑來緩解環(huán)磷酰胺引起的膀胱毒性已經(jīng)進(jìn)行了不少的研究，但對其機(jī)制的研究多集中在相關(guān)炎癥因子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控上，

3、而對其拮抗氧化應(yīng)激發(fā)揮作用的機(jī)制缺乏深入的研究。本實(shí)驗(yàn)通過環(huán)磷酰胺(CYP)致小鼠急性膀胱損傷模型，研究α-硫辛酸(α-LA)在急性膀胱損傷中的保護(hù)作用及意義，并對其拮抗氧化應(yīng)激發(fā)揮作用的機(jī)制進(jìn)行了研究，為α-硫辛酸(α-LA)的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用環(huán)磷酰胺(CYP)誘導(dǎo)急性膀胱損傷模型，40只雄性昆明小鼠隨機(jī)分為5組，每組8只。對照組、模型組、美司鈉組、VC干預(yù)組、α-硫辛酸干預(yù)組。于腹腔注射CYP24h后

4、取小鼠膀胱。稱量記錄膀胱重量的變化;H-E染色光鏡下觀察小鼠膀胱組織病理學(xué)改變;測定膀胱組織中活性氧(ROS)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物(TBARS)含量變化及抗氧化物酶活力的變化，評價(jià)a-硫辛酸對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的拮抗作用。本實(shí)驗(yàn)還用Western-blot的方法對MAPKs家族的p38，JNK，ERK這三條信號(hào)通路進(jìn)行了研究，對α-硫辛酸發(fā)揮作用的分子機(jī)制進(jìn)行了探討。
　　 本實(shí)驗(yàn)最終得出如下結(jié)論:(1)抗氧化劑α-硫辛酸(α-

5、LA)、VC能夠緩解CYP引起的小鼠膀胱損傷且能拮抗CYP誘導(dǎo)產(chǎn)生的氧化應(yīng)激。(2)模型組的P-p38、P-JNK水平明顯升高，而P-ERK水平變化不明顯，α-硫辛酸和VC能使P-p38，P-JNK水平恢復(fù)正常，說明α-硫辛酸通過調(diào)節(jié)p38，JNK這兩條信號(hào)通路的變化發(fā)揮對CYP誘導(dǎo)產(chǎn)生氧化應(yīng)激的拮抗作用。
　　 第二部分:綠原酸對四氯苯醌誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用及分子機(jī)制研究
　　 五氯酚(PCP)是一種應(yīng)用較廣的

6、的工農(nóng)業(yè)殺蟲劑，主要用于木材保護(hù)，在我國南方地區(qū)和一些發(fā)展中國家，PCP還被用于殺滅水螺以及預(yù)防血吸蟲病。PCP是一種高致癌物質(zhì)，長期慢性暴露于PCP的小鼠表現(xiàn)出肝臟腫瘤、血管內(nèi)皮瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤。在人體細(xì)胞及大鼠等嚙齒類動(dòng)物體內(nèi)PCP可被肝微粒體的細(xì)胞色素P450酶氧化脫氯形成四氯氫醌(TCHQ)，TCHQ還可進(jìn)一步經(jīng)四氯半醌自由基(TCSQ·)氧化成四氯苯醌(TCBQ)。四氯苯醌(TCBQ)是一種常用的染料中間體和農(nóng)用拌種劑，在環(huán)境中

7、大量存在。含醌類結(jié)構(gòu)的物質(zhì)在體內(nèi)的氧化還原過程會(huì)產(chǎn)生大量的活性氧(ROS)，進(jìn)而導(dǎo)致氧化應(yīng)激反應(yīng)，肝臟作為重要的代謝與解毒器官，TCBQ在體內(nèi)代謝會(huì)對肝臟造成損傷。
　　 綠原酸(CGA)是一種多酚類物質(zhì)，在許多類植物的葉和花蕾中含量豐富，具有廣泛的生物活性，具有抗菌、抗病毒、保肝利膽、抗腫瘤、將血壓、降血脂、清除自由基和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用。CGA是一種有效的酚型抗氧化劑，能消除羥基自由基和超氧陰離子自由基的活性，保護(hù)組織免

8、受氧化作用的損害。本實(shí)驗(yàn)通過四氯苯醌(TCBQ)致小鼠急性肝損傷的模型，研究綠原酸(CGA)在急性肝損傷中拮抗氧化應(yīng)激的作用及意義，為CGA的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用四氯苯醌(TCBQ)誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的模型，32只昆明小鼠隨機(jī)分為4組:對照組、CGA組、模型組和CGA干預(yù)組，每組8只。采用TCBQ腹腔注射誘導(dǎo)急性肝損傷模型。于致傷后24h取小鼠血清，測定血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(A

9、ST)、堿性磷酸酶(AKP)、血清膽紅素等水平;光鏡下觀察小鼠肝臟病理學(xué)改變;測定小鼠肝臟組織中ROS、TBARS、GSH水平的變化;SOD、CAT、GST、GSH-PX、GR活力的變化、免疫組化及W-B方法檢測肝組織HO-1、NQO1表達(dá)水平的變化。
　　 本文的結(jié)論如下:(1)CGA能夠拮抗TCBQ誘導(dǎo)的小鼠肝組織氧化應(yīng)激，保護(hù)肝組織免受氧化應(yīng)激的損傷。(2)CGA可能通過其抗氧化作用清除體內(nèi)過多的ROS，降低了TCBQ引起