9p21上位點(diǎn)多態(tài)性與糖尿病下肢血管病變的關(guān)聯(lián)研究及其與相關(guān)因素的交互作用探討.pdf

1、下肢血管病變(Peripheral arterial disease，PAD)是一種由環(huán)境和遺傳因素共同作用的復(fù)雜慢性病變，能明顯增加心血管事件、心血管死亡和全因死亡的風(fēng)險(xiǎn)。與非糖尿病患者相比，2型糖尿病患者PAD患病風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，而且發(fā)病年齡提前，病變進(jìn)展更加迅速。由于大多數(shù)糖尿病PAD患者缺乏明顯的臨床癥狀，使得糖尿病人群普遍存在PAD診斷不足的現(xiàn)象。
　　 在糖尿病患者中，許多非遺傳因素（如年齡、吸煙、血脂異常、高血壓、高

2、血糖和糖尿病病程）在PAD發(fā)生中扮演著重要角色。流行病學(xué)調(diào)查顯示，不同種族的糖尿病人群PAD患病率明顯不同，提示遺傳因素在糖尿病人群PAD的發(fā)生中可能占有重要角色。
　　 目前多數(shù)全基因組研究表明9號(hào)染色體短臂21號(hào)區(qū)域(9p21)基因變異與動(dòng)脈粥樣硬化疾病如冠心病、心肌梗死和腦中風(fēng)密切相關(guān)。在這個(gè)風(fēng)險(xiǎn)序列中具有代表性的兩個(gè)位點(diǎn)rs10757274和rs10757278的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide pol

3、ymorphism，SNP）與冠心病的相關(guān)性尤其突出。同時(shí)這兩個(gè)位點(diǎn)與缺血性腦中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)增加也顯著相關(guān)。PAD作為一種普通的動(dòng)脈粥樣硬化病變與冠心病和缺血性腦中風(fēng)分享著相似或相同的病因和發(fā)病機(jī)制。據(jù)我們目前所知，關(guān)于9p21上動(dòng)脈粥樣硬化病變易感位點(diǎn)與PAD相關(guān)性探討甚少，無(wú)論如何，9p21與糖尿病人群PAD的關(guān)聯(lián)研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 本課題選取唐山市工人醫(yī)院2型糖尿病患者為研究對(duì)象，分析其PAD的患病情況和非遺傳性危險(xiǎn)因

4、素，探討9p21上冠心病易感位點(diǎn)rs10757274和rs10757278和糖尿病人群PAD的關(guān)系以及這兩個(gè)位點(diǎn)與環(huán)境因素的交互作用對(duì)糖尿病人群PAD發(fā)生的影響，以期為糖尿病患者PAD的早期預(yù)防、治療和改善預(yù)后提供客觀依據(jù)。
　　 第一部分唐山市糖尿病下肢血管病變的發(fā)生率和非遺傳性危險(xiǎn)因素的分析
　　 目的:觀察唐山市2型糖尿病患者下肢血管病變的患病情況和非遺傳危險(xiǎn)因素。
　　 方法:采取整群抽樣的方法，從唐山市

5、3所三級(jí)甲等綜合性醫(yī)院中隨機(jī)抽樣，唐山市工人醫(yī)院作為調(diào)查醫(yī)院。本研究共入選年齡≥45歲2型糖尿病就診患者1389例，在研究人群中PAD人數(shù)為250例，非PAD人數(shù)為1139例。研究對(duì)象均被仔細(xì)登記一般情況和臨床資料，測(cè)量身高、體重、血壓和踝肱指數(shù)(ABI)，并檢測(cè)生化指標(biāo)。兩組間比較采用t檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)，危險(xiǎn)因素分析使用Logistic回歸分析。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS16.0完成。
　　 結(jié)果:所選糖尿病患者中P

6、AD者為250人，PAD的患病率為18.0％(95％CI，16.0％-20.0％)。年齡、收縮壓(SBP)、糖尿病病程、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、糖化血紅蛋白(HbA1c)、吸煙、高血壓、冠心病和腦梗死在PAD患者與非PAD患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05);性別、體重指數(shù)(BMI)、舒張壓(DBP)、總膽固醇(TC)和低密度脂蛋白(LDL-C)在PAD患者與非PAD患者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。糖尿

7、病患者PAD患病率隨著年齡增加而增加，卡方趨勢(shì)性檢驗(yàn)表明有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2趨勢(shì)=128.423，p＜0.01），多變量logistic回歸分析顯示（變量包含性別、年齡、BMI、吸煙、血脂、HbA1c、糖尿病病程、高血壓、冠心病和腦梗死，下同。），年齡是糖尿病患者PAD患病的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素(OR=1.084;95％CI:1.065-1.104; p＜0.01)。男性與女性糖尿病患者比較，PAD患病率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.412，P=0

8、.521），多變量logistic回歸分析顯示性別與糖尿病患者PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)(OR=1.428;95％CI:0.926-2.203; p=0.080)。糖尿病患者中BMI≥25者與BMI＜25者比較，PAD的患病率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.190，p=0.663），多變量logistic回歸分析顯示高BMI與糖尿病患者PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)（OR=1.063;95％CI:0.779-1.450; p=0.701）。吸煙與不吸煙者之間P

9、AD患病率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=8.048，p=0.005），多變量logistic回歸分析顯示吸煙是糖尿病患者PAD患病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（OR=1.831;95％CI:1.232-2.721;p=0.003）。多變量logistic回歸分析顯示低HDL-C和高HbA1c與糖尿病患者PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)(HDL-C: OR=1.419，95％CI:1.021-1.971，p=0.037; HbA1c: OR=1.495，95％CI:1.0

10、34-2.161，p=0.033);糖尿病患者PAD患病率隨著糖尿病病程的增加而增加，卡方趨勢(shì)性檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2趨勢(shì)=32.249，p＜0.01），多變量logistic回歸分析顯示糖尿病病程≥15年者PAD患病風(fēng)險(xiǎn)是＜5年者2倍多，(95％CI:1.365-2.981，p＜0.01)。糖尿病患者中高血壓人群與非高血壓人群比較，PAD患病率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=13.813，p＜0.01)，多變量logistic回歸分析顯示高血

11、壓是PAD的獨(dú)立因素（OR=1.559;95％CI:1.140-2.133，p=0.005）;糖尿病患者合并冠心病、腦梗死者與非合并者比較，PAD患病率差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)，多變量logistic回歸分析顯示冠心病和腦梗死均是糖尿病患者PAD發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（冠心病:OR=2.060，95％CI:1.479-2.868，p＜0.01;腦梗死:OR=1.962,95％CI:1.385-2.780,p＜0.01）。
　　

12、 小結(jié):本次調(diào)查中唐山市年齡≥45歲的糖尿病患者PAD的患病率為18％(95％CI，16.0％-20.0％)。年齡、吸煙、低HDL-C、高HbA1c、糖尿病病程、高血壓、冠心病和腦梗死是PAD發(fā)生的危險(xiǎn)因素。
　　 第二部分9p21上位點(diǎn)多態(tài)性與糖尿病下肢血管病變的關(guān)聯(lián)研究
　　 目的:探討9p21上位點(diǎn)多態(tài)性與糖尿病下肢血管病變的關(guān)系。
　　 方法:本研究選取的糖尿病人群年齡≥45歲。所有糖尿病人群均隨機(jī)選自

13、唐山市工人醫(yī)院內(nèi)分泌二科就診的2型糖尿病患者，其中PAD患者250例，年齡匹配的非PAD患者為252例。提取外周血DNA，應(yīng)用飛行質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)的技術(shù)完成樣品位點(diǎn)rs10757274和rs10757278單核苷酸多態(tài)性(SNP)的基因分型。
　　 兩組間比較采用t檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)，危險(xiǎn)因素分析使用Logistic回歸分析。所有的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS16.0完成。應(yīng)用haploview4.0評(píng)估基因位點(diǎn)

14、的哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)糖尿病人群中PAD組和非PAD組rs10757274和rs10757278基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(p＞0.05)。
　　 (2)在糖尿病人群中，這兩個(gè)位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率在PAD組和非PAD組之間均存在著顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。
　　 (3)在糖尿病人群

15、中，應(yīng)用累加基因模型(additive model)進(jìn)行分析，調(diào)整性別、年齡、吸煙、高血壓、血脂異常、HbA1c和糖尿病病程后，rs10757274是PAD患病的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素（OR=1.537，95％CI:1.169-2.020，p=0.002）。進(jìn)一步應(yīng)用多變量logistic回歸分析調(diào)整其他因素后顯示，rs10757274的AG基因型使糖尿病人群PAD的患病風(fēng)險(xiǎn)提高了約1.5倍（95％CI:1.002-2.414，p=0.049），

16、GG基因型則使其提高了約2.4倍（95％CI:1.359-4.086，p=0.002）。同樣，應(yīng)用additive model進(jìn)行分析，調(diào)整上述因素后，rs10757278也是是PAD患病的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素（OR=1.493，95％CI:1.140-1.955，p=0.004），進(jìn)一步多因素顯示，其GG基因型使糖尿病人群PAD的患病風(fēng)險(xiǎn)提高了約2.2倍(95％CI:1.304-3.855, p=0.003)。
　　 (4)在排除大血

17、管病變的敏感性分析中，應(yīng)用additive model進(jìn)行分析，在多變量logistic回歸分析中調(diào)整性別、年齡、吸煙、高血壓、血脂異常、HbA1c和糖尿病病程等因素后顯示，rs10757274仍與PAD患病的獨(dú)立相關(guān)（OR=1.476，95％CI:1.057-2.061，p=0.022）。進(jìn)一步應(yīng)用多變量logistic回歸分析調(diào)整其他因素后顯示，其GG基因型使糖尿病人群PAD的患病風(fēng)險(xiǎn)提高了約2.2倍（95％CI:1.127-4.2

18、89，p=0.021）。同樣，應(yīng)用additive model進(jìn)行分析，調(diào)整上述因素后，rs10757278也仍與PAD患病的風(fēng)險(xiǎn)獨(dú)立相關(guān)（OR=1.437，95％CI:1.034-1.997; p=0.031）。進(jìn)一步多因素分析顯示，其GG基因型使糖尿病人群PAD的患病風(fēng)險(xiǎn)提高了約2.1倍(95％CI:1.084-4.020, p=0.028).
　　 小結(jié):9p21上rs10757274和rs10757278基因多態(tài)性與糖尿

19、病人群PAD的患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。
　　 第三部分糖尿病下肢血管病變中9p21位點(diǎn)多態(tài)性與其他因素的交互作用研究
　　 目的:探討糖尿病患者中對(duì)于PAD影響9p21上rs10757274和rs10757278位點(diǎn)多態(tài)性與環(huán)境因素之間是否存在交互作用。
　　 方法:所選糖尿病人群同第二部分。應(yīng)用logistic回歸模型計(jì)算OR值和95％CI。所有數(shù)據(jù)分析采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。
　　 結(jié)果:以下OR值均

20、為多因素logistic回歸分析所得，包括的因素為年齡、性別、吸煙、血脂異常、高血壓、HbA1c和糖尿病病程（不包括變量本身，年齡除外），其中年齡為連續(xù)變量。
　　 (1)年齡與9p21上位點(diǎn)rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應(yīng)用additive model分析，在年齡＜65歲的糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=2.840，95％CI:1.579-5.109，

21、p＜0.05）;在年齡≥65歲的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與年齡＜65歲之間不存在交互作用(p=0.090)。同樣rs10757274的AG和GG基因型與年齡＜65歲之間不存在交互作用（p均＞0.05）。
　　 應(yīng)用additive model分析，在年齡＜65歲的糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=2.371，95％CI:1.334-4.213，p＜0.05），在年齡≥65

22、歲的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與年齡＜65歲之間不存在交互作用(p=0.241)。同樣，rs10757278的GG基因型與年齡＜65歲之間不存在交互作用(p=0.266)。
　　 (2)性別與9p21上位點(diǎn)rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應(yīng)用additive model分析，在男性糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.770，95

23、％CI:1.159-2.701，p＜0.05），在女性糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與性別之間不存在交互作用(p=0.388)。同樣，rs10757274的GG基因型與性別之間不存在交互作用(p=0.382)。
　　 應(yīng)用additive model分析，在男性糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.665，95％CI:1.096-2.528，p＜0.05），在女性糖尿病患者中，

24、該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與性別之間不存在交互作用(p=0.521)。同樣，rs10757278的GG基因型與性別之間不存在交互作用(p=0.458)。
　　 (3)吸煙與9p21上位點(diǎn)rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應(yīng)用additive model分析，在不吸煙的糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.710，95％CI:1.203-2.433

25、，p＜0.05），在吸煙的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與吸煙之間不存在交互作用(p=0.378)。同樣，rs10757274的GG基因型與吸煙之間不存在交互作用(p=0.353)。
　　 應(yīng)用additive model分析，在不吸煙的糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.724，95％CI:1.214-2.447，p＜0.05）;在吸煙的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)

26、無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與吸煙之間不存在交互作用(p=0.231)。同樣，rs10757278的GG基因型與吸煙之間不存在交互作用(p=0.236)。
　　 (4)血脂異常與9p21上位點(diǎn)rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應(yīng)用additive model分析，在血脂正常的糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=2.140，95％CI:1.103-4.154，p＜0.05）

27、，在血脂異常的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與血脂異常之間不存在交互作用(p=0.099)。同樣，rs10757274的AG和GG基因型與血脂異常之間不存在交互作用（p均＞0.05）。
　　 應(yīng)用additive model分析，在血脂正常的糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.964，95％CI:1.091-3.537，p＜0.05），在血脂異常的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD

28、患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與血脂異常之間不存在交互作用(p=0.236)。
　　 (5)高血壓與9p21上位點(diǎn)rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應(yīng)用additive model及該位點(diǎn)的AG和GG基因型進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，rs10757274及其AG和GG基因型與高血壓之間均不存在交互作用。
　　 應(yīng)用additive model分析，在血壓正常的糖尿病患者中，rs10757278與P

29、AD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.668，95％CI:1.093-2.545，p＜0.05），在血壓異常的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與高血壓之間不存在交互作用(p=0.634)。同樣，rs10757278的GG基因型與高血壓之間不存在交互作用(p=0.642)。
　　 (6)高HbA1c與9p21上位點(diǎn)rS10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分析
　　 應(yīng)用additive mode

30、l分析，在HbA1c正常的糖尿病患者中，rs10757274與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，在高HbA1c的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.501，95％CI:1.103-2.042，p＜0.05），然而這個(gè)位點(diǎn)與高HbA1c之間不存在交互作用(p=0.942)。同樣，rs10757274的GG基因型與高HbA1c之間不存在交互作用(p=0.948)。
　　 應(yīng)用additive model分析，在HbA1c正常的糖尿

31、病患者中，rs10757278與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，在高HbA1c的糖尿病患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.457，95％CI:1.076-1.973，p＜0.05），然而這個(gè)位點(diǎn)與高HbA1c之間不存在交互作用(p=0.899)。同樣，rs10757278的GG基因型與高HbA1c之間不存在交互作用(p=0.907)。
　　 (7)糖尿病病程與9p21上位點(diǎn)rs10757274與rs10757278多態(tài)性交互作用分

32、析
　　 應(yīng)用additive model分析，在糖尿病病程＜15年的患者中，rs10757274與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)（OR=1.584，95％CI:1.136-2.209，p＜0.05），在糖尿病病程≥15年的患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與糖尿病病程＜15年之間不存在交互作用(p=0.870)。同樣，rs10757274的AG和GG基因型與糖尿病病程＜15年之間均不存在交互作用(p均＞0.05)。
　

33、　 應(yīng)用additive model分析，在糖尿病病程＜15年的糖尿病患者中，rs10757278與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)(OR=1.528，95％CI:1.095-2.123，p＜0.05)，在糖尿病病程≥15年的患者中，該位點(diǎn)與PAD患病風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，然而這個(gè)位點(diǎn)與糖尿病病程＜15年之間不存在交互作用(p=0.857)。同樣，rs10757278的GG基因型與糖尿病病程＜15年之間不存在交互作用(p=0.749)。
　　 小結(jié):在