海洋真菌次生代謝產(chǎn)物鹿角縮酮B對(duì)大鼠CYP3A2的作用研究.pdf

1、目的:
　　本文通過計(jì)算機(jī)輔助的分子對(duì)接、體外肝微粒體溫孵法和大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究XyloketalB對(duì)大鼠肝CYP3A酶活性的影響,為臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.采用計(jì)算機(jī)輔助的分子對(duì)接法以Total-Score打分判斷Xyloketal B與CYP450主要亞型的空間結(jié)合能力。
　　2.以MDZ為“探針”底物,體外肝微粒體溫孵法考察Xyloketal B對(duì)大鼠肝CYP3A作用以及其作用機(jī)制。

2、r>　　3.以整體動(dòng)物為模型,MDZ為“探針”藥物,考察Xyloketal B對(duì)MDZ及其主要代謝產(chǎn)物1'-OH MDZ的藥代動(dòng)力學(xué)的影響,并用Western Blot和P450-GloTM試劑盒測(cè)定Xyloketal B對(duì)體內(nèi)CYP3A的影響。
　　結(jié)果:
　　1.通過分子對(duì)接的打分函數(shù)評(píng)價(jià)XyloketalB與CYP450主要亞型的空間結(jié)合能力,打分結(jié)果分別為:CYP3A4-3NXU:6.0461;CYP11B2-4DV

3、Q:5.0078;CYP2D6-3TBG:4.9342;CYP2C9-1R90:3.4475;CYP1A2-2HI4:-1.2051;CYP2E1-3T3Z:-8.3081;CYP2A6-2FDV:-16.2292;結(jié)合能力為:CYP3A4>CYP11B2>CYP2D6>CYP2C9>CYP1A2>CYP2E1>CYP2A6,提示XyloketalB與CYP3A4親和力最高,兩者的空間結(jié)合度最佳。
　　2.酶動(dòng)力學(xué)顯示,Xylok

4、etal B為大鼠肝微粒體CYP3A的弱抑制劑,IC50為27.91μmol/L,Ki、Ki'、KI和Kinact分別為41.85μmol/L、31.67μmol/L、0.063μmol/L和0.0037min-1,為不可逆的混合型非競(jìng)爭-反競(jìng)爭性抑制劑,并具有NADPH,孵育時(shí)間和濃度依賴性,表明Xyloketal B以Mechanism-based機(jī)制抑制CYP3A的活性。
　　3.結(jié)果表明:與生理鹽水和大豆油組比,酮康唑顯著

5、地增加了AUC0-t和Cmax,同時(shí)降低了CL/F和1'-OH MDZ和MDZ AUC0-inf的比值,并均顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與生理鹽水比,14 mg/kg Xyloketal B顯著性地升高了MDZ的AUC0-t和Cmax分別為1.68倍和2.73倍(p<0.05)。然而,CL/F和1'-OH MDZ和MDZ AUC0-inf的比值分別降低了2.22倍和1.63倍。但7 mg/kg Xyloketal B對(duì)MDZ的AUC0-t、Cma

6、x和CL/F無影響。當(dāng)與大豆油組比,Xyloketal B劑量依賴性地增加了MDZ的AUC0-t和Cmax,AUC0-t增加1.41-2.65倍(p<0.05或 p<0.01),Cmax增加1.36-2.84倍(p<0.05或 p<0.01),CL/F降低1.35-2.7倍(p<0.05)。與生理鹽水和大豆油組比,Xyloketal B劑量依賴性抑制了CYP3A2的蛋白表達(dá)和CYP3A2酶活性。
　　結(jié)論:
　　計(jì)算機(jī)輔助藥