草履蟲對海藻內生真菌次生代謝產物的抗性研究.pdf

1、草履蟲是原生動物纖毛綱中的一種極其具有代表性意義的原生動物。它具有許多的特點，研究者們常常喜歡用它作為檢測試劑生物活性的對象生物。第一，草履蟲存在范圍比較廣，能夠比較容易并且方便的采集到;第二，草履蟲的生命力對比其他單細胞動物較強，更容易培養(yǎng)起來;第三，草履蟲的個體比其他單細胞動物的個體較大，這樣更容易研究與觀察;第四，草履蟲反應比較靈敏，相比于其他復雜的多細胞生物，草履蟲對毒性物質的反應更為敏銳，減少了反應時間，能夠更直觀、準確的反應

2、出化合物的毒性;第五，相比于一般的化學方法的呆板，草履蟲作為反應對象能夠更加的形象并且生動有效的體現(xiàn)反應的過程和結果。海洋微生物跟大陸微生物的生存環(huán)境存在著非常迥異的差別，具有低溫、高壓、缺氧、高溫等特點，使海洋微生物產生了跟大陸微生物完全迥異的奇特并且又很繁雜的代謝方式、適應環(huán)境的方式和生存繁殖的方式，從而代謝產生了許多化學構造特別并且有著多種生物活性的次生代謝產物。因此它的次生代謝產物有著非常重大的研究意義。
　　本文對分離自

3、綠藻刺松藻(Codium fragile)和金膜藻(Chrysymenia wrightii)的兩株真菌長枝木霉(Trichoderma Longibrarachiatum)和集峰曲霉(Aspergillus nomius)選用了不同的培養(yǎng)基進行了規(guī)模發(fā)酵，分離純化了這兩株菌的次生代謝產物，并且對所得的大部分化合物進行了草履蟲抗性研究。次生代謝產物采用了硅膠柱層析、凝膠Sephadex LH-20柱層析、重結晶、制備薄層層析、高效液相色

4、譜等分離純化方式，一共得到了10個單體化合物，綜合運用現(xiàn)代波譜技術（1H-NMR、13C-NMR、DEPT等）、化學方法及與已報道的文獻比對對各個單體化合物的結構進行鑒定。對所得化合物進行草履蟲抗性實驗，從長枝木霉(Trichoderma Longibrarachiatum)分離到的5α，8α-環(huán)氧麥角甾-6，22-二烯-3β-醇對草履蟲的24 h半致死濃度為1.958μg/mL，麥角-7，22-二烯-3β,5α，6β-三醇對草履蟲24

5、h半致死濃度為2.108μg/mL，β-谷甾醇對草履蟲的24h半致死濃度為1.907μg/mL，5-羥基-3-甲基戊-2-烯酸對草履蟲的24 h半致死濃度為5.613μg/mL，harziane二萜對草履蟲的24 h半致死濃度為1.153μg/mL。從集峰曲霉(Aspergillus nomius)分離到的5α，8α-環(huán)氧麥角甾-6，22-二烯-3β-醇對草履蟲的24 h半致死濃度為1.907μg/mL，(24R)-24-甲基膽甾4，2

6、2-二烯-3-酮對草履蟲的24 h半致死濃度為2.827μg/mL，豆甾-4，22-二烯-3-酮對草履蟲的24 h半致死濃度為2.376μg/mL，豆甾-4-烯3-酮對草履蟲的24 h半致死濃度為2.245μg/mL。通過實驗發(fā)現(xiàn)，海藻內生真菌的次生代謝產物對草履蟲具有毒殺作用，并且在一定的范圍內致死率與化合物濃度呈現(xiàn)出線性關系，其中萜類化合物對草履蟲的毒殺作用最強，甾體類化合物對草履蟲的毒殺性大于酮類化合物，草履蟲對5-羥基-3-甲基