牛心樸子內(nèi)生真菌多樣性及次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、目的：內(nèi)生真菌是指存活于健康植物組織和器官內(nèi)部，而不引起宿主植物明顯病害癥狀的真菌，具有極其豐富的多樣性。近年來(lái)的研究表明內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎，活性獨(dú)特，甚至是與宿主結(jié)構(gòu)相同或相似的天然產(chǎn)物。本課題以沙生植物牛心樸子（Cynanchum komarovii Al.Iljinski）為實(shí)驗(yàn)材料，對(duì)采自寧夏古窯子、陜西榆林兩個(gè)不同地區(qū)野生新鮮植株，進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離、鑒定及代謝產(chǎn)物的抗真菌活性研究，并對(duì)活性菌株發(fā)酵物進(jìn)行化學(xué)成分的分離、

2、鑒定。
　　方法：采用組織分離法，在PDA培養(yǎng)基上分離植株內(nèi)生真菌，并對(duì)分離得到的內(nèi)生真菌進(jìn)行形態(tài)及分子鑒定；對(duì)分離得到的菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵物采用平板對(duì)峙法，以稻瘟霉模型對(duì)其代謝產(chǎn)物進(jìn)行抗真菌、抗腫瘤活性篩選；在活性追蹤指導(dǎo)下，采用現(xiàn)代色譜分離及鑒定技術(shù)，對(duì)活性菌株乙酸乙酯提取物進(jìn)行化學(xué)成分的分離和結(jié)構(gòu)解析。
　　結(jié)果：分離得到內(nèi)生真菌103株，其中寧夏產(chǎn)地47株，由根中分離得到5株，莖中分離得到14株，葉中分離得到28

3、株；采用形態(tài)學(xué)觀察以及分子鑒定方法，對(duì)分離得到的內(nèi)生真菌進(jìn)行鑒定，歸9個(gè)屬，分別為Epicoccum、Schizophyllum、Ustilago、Fusarium、Cosmospora、Gibberella、Leptosphaerulina、Lewia、Alternaria；陜西產(chǎn)地56株，由根中分離得到16株，莖中分離得到18株，葉中分離得到13株，花中分離得到9株，采用形態(tài)學(xué)觀察以及分子鑒定方法，對(duì)分離得到的內(nèi)生真菌進(jìn)行鑒定，歸8

4、個(gè)屬，分別為Schizophyllum、Lanzia、Nectriaceae、Fusarium、Gibberella、Hypocrea、Paraphoma、Alternaria。
　　通過(guò)初步篩選，發(fā)現(xiàn)其中2株L4（Dothideomycetidae-Epicoccum）、S17（Pleosporales-Phaeosphaeriaceae-Paraphoma）表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑菌活性。
　　從活性菌株L4發(fā)酵物中（8.3 g）