牛3個(gè)候選印記基因的組織表達(dá)及印記狀態(tài)分析.pdf

1、基因組印記是一種不遵循孟德爾定律的遺傳學(xué)現(xiàn)象，是指等位基因通過DNA或組蛋白的表觀遺傳修飾而產(chǎn)生的親本基因差異表達(dá)的現(xiàn)象。父源等位基因沉默，而母源等位基因激活的基因稱為父源印記基因;反之，母源沉默父源激活的基因稱為母源印記基因。目前，印記基因的研究主要集中在人和小鼠中，被鑒定的印記基因總數(shù)超過200個(gè)，而牛中印記基因的研究相對(duì)較少，已經(jīng)確認(rèn)的只有34個(gè)(http://igc.otago.ac.nz/Search.html)。印記基因在染

2、色體上成簇分布且高度保守。Cdkn1c-Kcnq1ot1印記域中的印記基因，與Beckwith-Wiedemann Syndrome和個(gè)體健康的生長發(fā)育有密切聯(lián)系。
　　本研究選取Cdkn1c-Kcnq1ot1印記域中在鼠中被鑒定為母源表達(dá)的Cdkn1c、Phlda2和Nap1l4印記基因?yàn)檠芯繉?duì)象，通過RT-PCR方法分析了Cdkn1c、Phlda2和Nap1l4基因在成年牛組織中的表達(dá)狀態(tài)。結(jié)果表明，Cdkn1c基因在成年牛的

3、心、肝、肺、脾、骨骼肌和脂肪6個(gè)組織表達(dá)，Nap1l4基因在成年牛的心、肝、脾、肺、腎、骨骼肌和脂肪7個(gè)組織都表達(dá)，Phlda2基因在成年牛的肝、脾、肺、腎和骨骼肌5個(gè)組織都表達(dá)。
　　本研究應(yīng)用基于SNP(single nucleotide polymorphism，SNP)位點(diǎn)的測序法分析等位基因的表達(dá)。首先利用PCR產(chǎn)物直接測序的方法尋找Cdkn1c、Phlda2和Nap1l4基因的SNP位點(diǎn)，確定雜合子。在Cdkn1c基因

4、第二外顯子的129 bp位置上找到一個(gè)(C/G)SNP位點(diǎn)，在Nap11l4基因第十五外顯子的335 bp位置上找到一個(gè)(A/T)SNP位點(diǎn)，在Phlda2基因第二外顯子的68 bp位置上找到一個(gè)(A/T) SNP位點(diǎn)，通過RT-PCR產(chǎn)物直接測序法檢測Cdkn1c、Phlda2和Nap1l4基因在雜合子牛中等位基因的特異性表達(dá)。發(fā)現(xiàn)Cdkn1c基因在成年牛的心、肝、肺、脾、骨骼肌和脂肪6個(gè)組織中表現(xiàn)為單等位基因表達(dá)，而Phlda2和N