牛Meg8基因的克隆、組織表達及印記狀態(tài)分析.pdf

1、基因組印記是一種表觀遺傳現象,來自親本的等位基因或染色體在發(fā)育過程中產生專一性的加工修飾,導致后代細胞中兩個親本來源的等位基因有不同的表達活性,具有這種親本差異性表達現象的基因稱為印記基因。Dlk1-Dio3區(qū)域是在哺乳動物中相對保守的一個印記基因簇,該區(qū)域內的印記基因參與調控胚胎、胎盤發(fā)育和肌肉形成。Dlk1-Dio3印記區(qū)域在人和鼠中研究的較多,由于基因序列及多態(tài)信息的限制,在牛中相關報道較少。
　　 本研究選取Dlk1-D

2、io3印記域中在鼠和羊中被鑒定為母源表達印記的Meg8基因為研究對象。首先采用RT-PCR和RACE方法得到該基因的cDNA序列(Genebank登錄號:HQ407410-HQ407422)。序列分析表明牛Meg8基因至少存在12種可變剪接形式,DNA序列全長約43 kb,cDNA序列全長1062 bp,包括7個外顯子,外顯子表現出與羊高度的相似性(82.8％～97.7％)。牛Meg8基因5'側翼區(qū)未發(fā)現與Kozak規(guī)則相匹配的翻譯起始

3、序列,推測該基因是一種非編碼RNA,可能作為一種RNA調解分子調控靶基因的轉錄。以上研究結果將為進一步分析該基因的生物學功能以及揭示其分子調控機制奠定基礎。
　　 通過RT-PCR方法分析了Meg8基因在成年牛各個組織中的表達情況,結果表明,Meg8基因在成年牛的心、肝、脾、肺、腎、腦、肌肉和脂肪都表達RNA,未表現出在鼠和羊中所報道的組織特異性。
　　 印記基因的表達是基于基因的單等位基因表達,為了研究基因是單等位基因

4、表達還是雙等位基因表達,必須找出一個表達的多態(tài),并且要求被研究的動物是雜合子,由此能辨別是哪一個親本基因被轉錄。哺乳動物基因組中最常見的多態(tài)是SNP,包括DNA點突變,即堿基對的插入或缺失,可以在基因組水平上檢測出這種突變。SSCP技術是一種簡單、快速、可重復性好的方法,廣泛用于尋找基因突變和DNA分型。本研究首先應用PCR-SSCP方法尋找Meg8基因中表達的多態(tài),鑒定雜合子,通過RT-PCR及直接測序法分析雜合子牛的心、肝、脾、肺、