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文檔簡(jiǎn)介
1、背景與目的:
輔助生殖技術(shù)(ART)是治療人類不孕不育的一種常規(guī)方法,盡管ART在實(shí)施時(shí)各項(xiàng)技術(shù)已盡量模擬母體受孕內(nèi)環(huán)境的各項(xiàng)條件,但由于ART本身的非生理性操作,可能影響配子和胚胎的發(fā)育,甚至增加子代成年期疾病易感性,許多研究也表明ART子代早期流產(chǎn)、圍產(chǎn)期疾病及出生低體重的風(fēng)險(xiǎn)增加,但病因仍不清楚。目前對(duì)于ART子代安全性的研究多集中在表觀遺傳方面,認(rèn)為ART各操作過程可能影響子代的與生長發(fā)育相關(guān)印記基因的表達(dá),因此了
2、解這些印記基因在ART妊娠期的變化,探索相關(guān)機(jī)制,可為改善其不良出生結(jié)局和后期發(fā)育風(fēng)險(xiǎn)做出貢獻(xiàn)。
PEG10是位于7q21上的父系表達(dá)基因,在胎兒及胎盤生長發(fā)育過程中起到重要作用,許多實(shí)驗(yàn)也證實(shí)PEG10表達(dá)異常,會(huì)引起胚胎早期死亡、流產(chǎn),妊娠期疾病風(fēng)險(xiǎn)增加,同時(shí)發(fā)現(xiàn)其在多種癌癥中激活。L3MBTL1是位于20q13.12上的父系表達(dá)基因,其可調(diào)節(jié)正常和惡性細(xì)胞的自我更新,許多實(shí)驗(yàn)表明其表達(dá)水平正常,對(duì)細(xì)胞的正常有絲分裂和
3、減數(shù)分裂有重要作用,同時(shí)其在許多骨髓惡性腫瘤中易缺失。那么這兩個(gè)印跡基因在ART子代表達(dá)如何,其調(diào)節(jié)機(jī)制又是什么,目前研究較少。因此,我們采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QRT-PCR)和甲基化特異性PCR方法(MSP)檢測(cè)ART子代減胎胚胎、胎盤和臍血中兩個(gè)基因的表達(dá)及甲基化情況,從妊娠早期和晚期的角度分別探討其表達(dá)異常的意義和表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制,為改善其不良出生結(jié)局提供新的思路。
材料和方法:
ART組和正常對(duì)照組均分
4、為三種組織,即胚胎、胎盤和臍血。收集ART多胎妊娠行減胎術(shù)的減胎胚胎和自然妊娠行人工流產(chǎn)的胚胎組織各15例;ART和自然妊娠子代出生時(shí)臍血和胎盤各30例。比較兩組臨床資料;應(yīng)用QRT-PCR方法檢測(cè)各組織中目的基因mRNA表達(dá)水平并比較;應(yīng)用MSP方法檢測(cè)目的基因甲基化狀態(tài)并比較,結(jié)果利用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。
結(jié)果:
1.ART組與正常對(duì)照組在母親的年齡、孕周、新生兒性別和新
5、生兒平均出生體重方面均無顯著性差異(P>0.05),但ART組新生兒平均出生體重低于對(duì)照組。
2.ART組胚胎中PEG10、L3MBTL1mRNA相對(duì)表達(dá)量(RQ值)均下調(diào)(P<0.05);臍血和胎盤組織中PEG10RQ值均上調(diào)(P<0.05),而L3MBTL1RQ值在胎盤組織中下調(diào)(P<0.05),在臍血中無差別(P>0.05)。
3.ART組中,PEG10RQ值在三種組織間比較,胎盤和臍血均高于胚胎組織(
6、P<0.05),而胎盤和臍血之間無差異(P=0.296);L3MBTL1RQ值在三種組織間比較無差異(P=0.088)。
4.ART組胚胎中PEG10、L3MBTL1啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率均高于正常對(duì)照組(P<0.05);臍血和胎盤中PEG10啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率均低于正常對(duì)照組(P<0.05);而L3MBTL1啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率在胎盤中高于正常對(duì)照組(P<0.05),在臍血中兩組間無差異(P>0.05)。
7、5.ART組中,PEG10啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率在三種組織間比較,胎盤和臍血均低于胚胎(P<0.05),而胎盤和臍血之間無差異(P>0.05),L3MBTL1啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率在三種組織間比較無差異(P>0.05)。
6.ART組中,甲基化的胚胎、胎盤和臍血中PEG10、L3MBTL1RQ值均低于非甲基化的相應(yīng)標(biāo)本(P<0.05)。在甲基化的胎盤和臍血中PEG10RQ值均高于胚胎組織(P<0.05),而非甲基化的各類標(biāo)本之
8、間無差異(P>0.05);甲基化和非甲基化的各類標(biāo)本中L3MBTL1RQ值比較均無差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1.ART后妊娠早期印記基因PEG10、L3MBTL1的轉(zhuǎn)錄表達(dá)均下調(diào),妊娠晚期PEG10轉(zhuǎn)錄表達(dá)上調(diào)而L3MBTL1轉(zhuǎn)錄表達(dá)下調(diào),印記基因表達(dá)異??赡苁且餉RT子代出生結(jié)局不良的原因。
2.ART后妊娠早期印記基因PEG10、L3MBTL1啟動(dòng)子區(qū)甲基化陽性率均較高,妊娠晚期PE
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