食管鱗癌中SOX7基因表達(dá)及其甲基化狀態(tài)研究.pdf

1、目的:我國(guó)是食管癌的高發(fā)國(guó)，由于食管癌臨床表現(xiàn)的隱匿性，多數(shù)患者就診時(shí)已屬中晚期，預(yù)后差，嚴(yán)重威脅著人們的健康。因此，探索食管癌的發(fā)病機(jī)制及尋找有效的基因治療靶點(diǎn)，是降低食管癌發(fā)病率及死亡率的重要途徑。
　　食管癌發(fā)病是多因素、多階段、多基因變異的復(fù)雜過程，在分子水平上涉及眾多原癌基因、抑癌基因以及蛋白質(zhì)的改變?；虻谋碛^遺傳學(xué)修飾是不涉及DNA序列改變的一種修飾形式，其中基因甲基化是最常見的修飾途徑。研究表明許多腫瘤組織中均存在

2、SOX基因家族的異常表達(dá)，而SOX基因家族又與Wnt/β-catenin信號(hào)通路有著密切的關(guān)系。SOX7基因作為此家族的重要成員日益引起研究者的重視。序列檢索發(fā)現(xiàn)，SOX7基因的啟動(dòng)子區(qū)存在多個(gè)CpG島，推測(cè)該基因也可能存在甲基化修飾現(xiàn)象。本研究通過檢測(cè)食管癌細(xì)胞系和食管癌患者癌組織及相應(yīng)癌旁組織中WNT通路相關(guān)基因SOX7啟動(dòng)子區(qū)的甲基化狀態(tài)，并分析與該基因mRNA及蛋白表達(dá)的相關(guān)性，探討SOX7基因在食管鱗癌中的作用及表達(dá)調(diào)控機(jī)制。

3、
　　方法:
　　1應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chainreaction，RT-PCR)技術(shù)分別檢測(cè)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-dC處理前后的食管癌細(xì)胞系(Yes-2、EC109、TE1、T.TN)以及58例食管鱗癌組織及癌旁組織中SOX7基因的mRNA表達(dá)情況。
　　2應(yīng)用免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry) SP法檢測(cè)58例

4、食管鱗癌組織及癌旁組織中SOX7蛋白的表達(dá)情況。
　　3應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation specific polymerase chain reaction，MSP)技術(shù)分別檢測(cè)5-aza-dC處理前后的食管癌細(xì)胞系和58例食管鱗癌組織及癌旁組織中SOX7基因的甲基化狀態(tài)。
　　4運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　1食管鱗癌中SOX7基因mRNA、蛋白表達(dá)以及與各

5、臨床指標(biāo)之間的關(guān)系
　　1.1食管鱗癌及相應(yīng)癌旁組織中SOX7基因mRNA表達(dá)情況及與各臨床指標(biāo)之間的關(guān)系
　　SOX7基因mRNA在食管鱗癌組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.36±0.09，在癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.61±0.13，食管鱗癌組織中SOX7基因的mRNA表達(dá)量明顯低于癌旁組織，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=12.772，P＜0.05)。在食管鱗癌患者中，SOX7的mRNA表達(dá)與患者腫瘤TNM分期、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均

6、有關(guān)(P＜0.05)。
　　1.2食管鱗癌及相應(yīng)癌旁組織中SOX7基因蛋白表達(dá)情況及與各臨床指標(biāo)之間的關(guān)系
　　58例食管鱗癌組織中有16例SOX7基因蛋白表達(dá)陽性，陽性表達(dá)率為27.6％(16/58);而相應(yīng)癌旁組織中有42例SOX7蛋白呈陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為72.4％(42/58)，食管鱗癌組織中該基因蛋白陽性表達(dá)率顯著低于相應(yīng)癌旁組織(x2=16.004，P＜0.01)。在食管鱗癌中，SOX7蛋白表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

7、移有關(guān)(P＜0.05)，而與腫瘤組織分期和分級(jí)無關(guān)(P＞0.05)。
　　2食管鱗癌中SOX7基因表達(dá)下調(diào)的機(jī)制研究
　　2.1 SOX7 mRNA在食管癌細(xì)胞系中經(jīng)5-aza-dC處理前后的表達(dá)情況
　　檢測(cè)Yes-2、EC109、TE1、T.TN四株食管癌細(xì)胞系中SOX7基因mRNA表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)TE1中SOX7基因mRNA表達(dá)呈陽性，Yes-2、EC109、T.TN細(xì)胞株中該基因mRNA表達(dá)缺失，經(jīng)5-aza-d

8、C處理培養(yǎng)后，四株細(xì)胞系均檢測(cè)出SOX7 mRNA的表達(dá)。
　　2.25-aza-dC處理前后食管癌細(xì)胞系中SOX7基因的甲基化狀態(tài)
　　在5-aza-dC處理前Yes-2、EC109、T.TN細(xì)胞株中SOX7基因表現(xiàn)為高甲基化狀態(tài)，應(yīng)用甲基化抑制劑5-aza-dC處理后該四種細(xì)胞株中SOX7基因均表現(xiàn)為非甲基化狀態(tài)。在5-aza-dC處理前TE1細(xì)胞株表現(xiàn)為不完全甲基化狀態(tài)，應(yīng)用甲基化抑制劑5-aza-dC處理后表現(xiàn)為非甲

9、基化狀態(tài)。
　　2.3食管鱗癌組織中SOX7基因的甲基化狀態(tài)及與各臨床指標(biāo)之間的關(guān)系
　　在食管鱗癌組織中SOX7基因的甲基化陽性率(53.4％，31/58)顯著高于癌旁組織中該基因甲基化陽性率(29.3％，17/58)(x2=8.652，P=0.000)。低分化鱗癌組SOX7基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化發(fā)生率(71.2％，23/31)顯著高于高中分化鱗癌組甲基化發(fā)生率(29.6％，8/27)（x2=11.518，P＜0.05）;在有

10、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組SOX7基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化發(fā)生率(69.0％，20/29)顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的甲基化發(fā)生率(37.9％，11/29)(x2=5.613，P＜0.05);根據(jù)TNM分期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Ⅰ+Ⅱ期食管鱗癌組中SOX7基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化發(fā)生率(41.5％，17/41)顯著低于Ⅲ+Ⅳ期食管鱗癌組SOX7基因啟動(dòng)子區(qū)的甲基化發(fā)生率(82.4％，14/17)(x2=8.074，P＜0.05);SOX7基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化率與食管鱗癌患

11、者的年齡、性別、吸煙、飲酒等無關(guān)(P＞0.05)。
　　2.4食管鱗癌組織中SOX7 mRNA、蛋白表達(dá)以及基因甲基化之間的關(guān)系
　　SOX7基因發(fā)生甲基化的食管癌組織mRNA相對(duì)表達(dá)量為0.28±0.08，顯著低于未發(fā)生甲基化的食管癌組織中mRNA的相對(duì)表達(dá)量0.41±0.08，（t=-6.249，P＜0.05）。SOX7基因啟動(dòng)子區(qū)發(fā)生高甲基化的食管鱗癌組織SOX7蛋白表達(dá)陽性率(12.9％，4/31)顯著低于未發(fā)生甲基

12、化的食管鱗癌組織SOX7蛋白表達(dá)陽性率(44.4％，12/27)(x2=7.187，P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1食管鱗癌組織中SOX7基因mRNA、蛋白的表達(dá)低于癌旁組織，提示食管鱗癌中SOX7基因可能為候選抑癌基因，其表達(dá)下調(diào)可能是食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制之一。
　　2 SOX7基因在多數(shù)食管癌細(xì)胞株中表達(dá)降低或缺失，并呈現(xiàn)高甲基化狀態(tài)，在經(jīng)5-aza-dC處理后可逆轉(zhuǎn)高甲基化狀態(tài)并使SOX7恢復(fù)表達(dá)，提示甲基化可